[发明专利]一种高纯度单链DNA制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种高纯度单链DNA制备方法及其应用，解决现有方法的不足，本发明在传统化学合成方法的基础上进行创新性的改进和扩展，既可以结合传统的化学合成法也可以独立于传统的化学合成法单独使用，即用dUTP代替dTTP扩增—UDG酶消化法提供了一种制备单链DNA的方法。本发明解决传统化学法合成单链DNA产物纯度低、产量低、单链DNA长度受限、成本高、平行性差的缺点。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，特别涉及单链DNA的合成。

背景技术

单链DNA是分子生物学领域乃至整个生命科学领域的一个重要的研究对象，近年来，在生物医药研究和发展中取得了重大突破，反义单链DNA已经被开发为基因靶向治疗的药物，用于抗病毒，抗肿瘤以及遗传性疾病的治疗。同时，单链DNA也是生命科学领域的一个基本工具，如生物基因组快速扫描技术，二代测序技术，SELEX技术等方面均用到大量的单链DNA，因此，单链DNA的应用范围特别广泛，作为引物用到DNA测序和PCR扩增中；作为探针用于克隆杂交诊断杂交，作为药物用于反义疗法，还可以用于核磁共振以及X射线晶体分析法来进行生理学研究。

目前为止，单链DNA的主要获得途径还是化学合成，化学合成的方式主要有固相合成法和液相合成法，这两种方法均存在产物纯度低，纯化困难，合成的目标序列出错率高的缺点，尤其是需要大量的单链DNA时，其合成的价格十分昂贵，大大限制了寡核苷酸的研究和应用。

为了解决这些问题，芯片技术应运而生，这种技术虽然为大规模平行合成单链DNA提供了一种相对简单便捷的方法，但是由于受到DNA合成种类或实验室条件的限制而无法成为实验室生产单链DNA的常规方法。

发明内容

为了解决上述现有各种方法的不足，本发明在传统化学合成方法的基础上进行创新性的改进和扩展，既可以结合传统的化学合成法也可以独立于传统的化学合成法单独使用，即用dUTP代替dTTP扩增—UDG酶消化法提供了一种制备单链DNA的方法。

本发明解决传统化学法合成单链DNA产物纯度低、产量低、单链DNA长度受限、成本高、平行性差的缺点。

根据本发明技术方案的其中一方面，本发明提供了一种高纯度单链DNA制备方法，本发明高纯度单链DNA制备方法使用dUTP扩增-UDG酶消化法。

根据本发明技术方案的其中一方面，本发明提供了一种高纯度单链DNA制备方法，步骤为：

步骤1含dUTP模板的扩增

使用DNA模板，使用引物对，以dUTP进行DNA模板扩增；

步骤2单链DNA的扩增

以步骤1中以dUTP扩增获得的dsDNA为模板扩增获得单链DNA；

步骤3UDG酶消化

将步骤2的单链DNA的扩增产物加入UDG酶进行处理，获得目标单链DNA。

根据本发明技术方案的其中一方面，本发明提供了一种高纯度单链DNA制备方法，其中步骤1中DNA模板为λDNA，引物对为250-F和250-R。

根据本发明技术方案的其中一方面，本发明提供了一种高纯度单链DNA制备方法，其中250-F序列如SEQ ID No.1:

5’-GTTTAAACGGATCTCTAGCGAATTCGGCTCTGCTAACACGTTGCTC-3’；

250-R的序列如SEQ ID No.2：

5’-CATTACAAACGTCCTTCTCGGTGCAAGCTTGCTAGCGGCCGCTCGAGGC-3’。