[发明专利]一种高纯度单链DNA制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201811651523.7 | 申请日： | 2018-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN109609495B | 公开（公告）日： | 2023-05-23 |
| 发明（设计）人： | 赵曼曼;任少华;郑实;任加庆;臧赢 | 申请（专利权）人： | 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 苏州修合知识产权代理事务所(普通合伙) 32640 | 代理人： | 刘文骞 |
| 地址： | 215200 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 纯度 dna 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种高纯度单链DNA制备方法，其特征在于，所述高纯度单链DNA制备方法步骤为：
步骤1含dUTP模板的扩增使用DNA模板，使用引物对，以dUTP进行DNA模板扩增，所述DNA模板为λDNA，所述引物对为250-F和250-R；
步骤2单链DNA的扩增以步骤1中以dUTP扩增获得的dsDNA为模板扩增获得单链DNA；
步骤3UDG酶消化将步骤2的单链DNA的扩增产物加入UDG酶进行处理，获得目标单链DNA；
所述250-F序列如SEQ ID No.1：
5’-GTTTAAACGGATCTCTAGCGAATTCGGCTCTGCTAACACGTTGCTC-3’；
所述250-R的序列如SEQ ID No.2：
5’-CATTACAAACGTCCTTCTCGGTGCAAGCTTGCTAGCGGCCGCTCGAGGC-3’；
所述步骤1使用PCR扩增，步骤1的PCR扩增的加样体系：
PCR反应程序：
预变性94℃，5min
变性94℃，20s
退火65℃，20s
延伸72℃，20s变性、退火、延伸30-50循环
终延伸72℃，5min；
所述步骤2为PCR扩增，
步骤2的PCR扩增的加样体系：
dsDNAdU100ng/μL 1μL
2×Taq Master Mix 25μL
250-F 1μL
ddH2O to 50μL
PCR反应程序：
预变性94℃，5min
变性94℃，20s
退火65℃，20s
延伸72℃，20s变性、退火、延伸30-50循环
终延伸72℃，5min；
所述步骤3的步骤为在步骤2的每50μL PCR产物中加1μL UDG1U/μL酶处理，50℃，1min；95℃，10min。
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