[发明专利]一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物的方法

权利要求书

1.一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物含量的方法，其特征在于，所述地蜈蚣来源于水龙骨科植物多羽节肢蕨Arthromeris mairei（Brause）Ching；方法包括供试品溶液制备、对照品溶液制备、检测和分析步骤，具体包括

（1）供试品溶液的制备：取地蜈蚣药材粉末1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇水50mL，称定质量，加热回流；放冷，再称定重量，加溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取滤液5mL置25mL的容量瓶中，加甲醇水定容，摇匀，即得供试品溶液；

（2）对照品溶液制备：

A、精密称定阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖对照品，用50%甲醇配制成浓度为20μg•mL^-1的对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得对照品溶液A，备用；

B、分别精密称定紫云英苷、Multiflorin B、阿福豆苷、Multiflorin A对照品，混合后用甲醇配制成紫云英苷浓度0.8μg•mL^-1、Multiflorin B浓度54μg•mL^-1、阿福豆苷浓度1.5μg•mL^-1、Multiflorin A浓度20μg•mL^-1的混合溶液，得到对照品溶液即得对照品溶液B，备用；

（3）检测：将供试品溶液、对照品溶液A和对照品溶液B注入高效液相色谱仪进行检测；供试品溶液的高效液相色谱仪色谱条件为：

A、色谱柱：4.6×250mm、5μm的Waters C¹⁸，流动相为：甲醇:水V/V=35:65等度洗脱；流速1.0mL·min^-1，柱温25℃，检测波长230nm，进样量10μL；

B、色谱柱：4.6×250mm、5μm的Waters SunFire C¹⁸，流动相为0.2%磷酸水溶液C-甲醇D，梯度洗脱：0~30min，C:D V/V=53:47；30~40min，47%D→66%D；流速1.0mL·min^-1，检测波长265nm，柱温25℃，进样量10μL；

对照品溶液A、B的高效液相色谱仪色谱条件分别为上述条件A、B；

（4）以外标法进行地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物成分的定量分析：以已知浓度的黄酮类化合物的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，对供试品溶液进行测定，测得检出供试品溶液中5种黄酮类化合物成分的色谱峰面积，代入标准曲线，求得地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物成分的含量。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（1）中所述地蜈蚣药材粉末的粒度为65目。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（1）中所述甲醇水浓度为75%甲醇。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（1）中所述加热回流时间为1h。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤（1）中所述提取温度为70℃±2℃。