[发明专利]一种去除生物样品中无核红细胞的试剂及在DNA提取中应用在审
| 申请号： | 201811649625.5 | 申请日： | 2018-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN109852607A | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 吴大治;夏懿;吴梅 | 申请（专利权）人： | 上海星耀医学科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201315 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 红细胞 裂解试剂 去除 无核红细胞 生物样品 核细胞 金属离子螯合剂 应用 无机盐 细胞核 表面活性剂 产品稳定性 安全环保 长期储存 分离富集 缓冲体系 冷藏保存 冷链运输 血液样品 有效裂解 组分稳定 组织细胞 预热 核酸 裂解 配制 取出 | ||
1.本发明一种去除生物样品中无细胞核红细胞的裂解试剂，其特征在于，红细胞裂解试剂含有以下组分：金属离子螯合剂、无机盐、表面活性剂以及溶液缓冲体系。
2.如权利要求1所述的红细胞裂解试剂，其特征在于，金属螯合剂为乙二胺四乙酸钠或次氮基三乙酸钠，浓度为1～5mmol/L。
3.如权利要求1所述的红细胞裂解试剂，其特征在于，无机盐为氯化钠或氯化钾，浓度为15～50mmol/L。
4.如权利要求1所述的红细胞裂解试剂，其特征在于，表面活性剂为曲拉通 X-100或吐温20，浓度为0.3～0.8%（v/v）。
5.如权利要求1所述的红细胞裂解试剂，其特征在于，溶液缓冲体系为Tris-HCl缓冲液，浓度为5～20mmol/L，pH7.5～8.0。
6.如权利要求1所述的红细胞裂解试剂，其特征在于，试剂含有2mmol/L 乙二胺四乙酸钠或次氮基三乙酸钠、35mmol/L 氯化钠或氯化钾、0.5%（v/v）曲拉通 X-100或吐温20、10mmol/L Tris-HCl，pH7.8。
7.如权利要求1所述的红细胞裂解试剂，其特征在于，涉及的生物样品是指人、鼠等脊椎哺乳生物的全血样品或组织细胞样品。
8.如权利要求1所述的红细胞裂解试剂，其特征在于，裂解生物样品无核红细胞的操作步骤为：（1）取全血样品或组织细胞样品，按照和红细胞裂解试剂1:2～1:5的比例混合1min，10,000rpm离心1min弃上清液体保留富集的细胞沉淀；（2）在富集的细胞沉淀中加入1～2ml红细胞裂解试剂，混匀重悬沉淀，10,000rpm离心1min弃上清液体保留细胞沉淀；（3）在去除无核红细胞的沉淀中加入磷酸盐PBS缓冲液或细胞培养基重悬，用于核酸或蛋白提取和分析检测，以及后续细胞原代培养或细胞融合等操作。
9.如权利要求1所述的红细胞裂解试剂在生物样品DNA提取中的应用，其特征在于，操作步骤为：（1）取全血样品或组织细胞样品，按照和红细胞裂解试剂1:2～1:5的比例混合1min，10,000rpm离心1min弃上清液体保留富集的细胞沉淀；（2）在富集的细胞沉淀中加入1～2ml红细胞裂解试剂，混匀重悬沉淀，10,000rpm离心1min弃上清液体保留细胞沉淀；（3）在富集的细胞沉淀中加入0.05～0.1ml DNA提取液，混合重悬沉淀，100℃保温5min；（4）12,000rpm离心2min，吸取的上清中即为提取的细胞总DNA，可用于下游PCR等基因检测。
10.如权利要求9所述的红细胞裂解试剂在生物样品DNA提取中的应用，其特征在于，DNA提取液含有10mmol/L NaOH、0.1% SDS。
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