[发明专利]一种血清胰腺癌外泌体特异蛋白及其再验证过程

说明书

本发明提供一种血清胰腺癌外泌体特异蛋白，包括蛋白ADAM10、蛋白CFHR1、蛋白APOA4、蛋白Testicular tissue protein Li 70、蛋白HEL‑S‑78p、蛋白PGLYRP2、蛋白IGFALS、蛋白BCHE、蛋白ANPEP、蛋白LBP、蛋白C9、蛋白PZP、蛋白ANXA11。本发明还提供一种血清胰腺癌外泌体特异蛋白再验证过程，包括以下步骤：S1、分离血清样品中的无外泌体血清与外泌体；S2、采用步骤S1分离得到的外泌体，制备出外泌体PBS溶液；S3、通过透射电子显微镜来检查外泌体的超微结构；S4、通过蛋白质印迹分析来检测一些外泌体表面标志物蛋白的表达。本发明的血清胰腺癌外泌体特异蛋白，能够用于制备诊断胰腺癌的相关产品，血清胰腺癌外泌体特异蛋白再验证过程具有绝对特异性、高通量、无干扰、能够识别大分子异构体和小分子的优点。

技术领域

本发明属于血清胰腺癌外泌体特异蛋白的验证方法技术领域，具体涉及一种血清胰腺癌外泌体特异蛋白及其再验证过程。

背景技术

目前，血清胰腺癌外泌体特异蛋白的验证方法是用蛋白对应的特异性抗体检测外泌体的方法。细胞和组织常用Western Blot的方法：经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。血清等液体常用ELISA的方法：①使抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗体与某种酶连接成酶标抗体，这种酶标抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本和酶标抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。然而，各种蛋白需要对应的各种抗体，而且抗体获得难度大、质量也是参差不齐，是研究面临的技术障碍之一。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种血清胰腺癌外泌体特异蛋白、其应用及其再验证过程，以解决背景技术中所提出的问题；同时对胰腺癌血清外泌体特异蛋白(ADAM10、CFHR1、APOA4、Testicular tissue protein Li 70、HEL-S-78p、PGLYRP2、IGFALS、BCHE、ANPEP、LBP、C9、PZP、ANXA11)进行验证。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种血清胰腺癌外泌体特异蛋白，其特征在于，包括蛋白ADAM10、蛋白CFHR1、蛋白APOA4、蛋白Testiculartissue protein Li70、蛋白HEL-S-78p、蛋白PGLYRP2、蛋白IGFALS、蛋白BCHE、蛋白ANPEP、蛋白LBP、蛋白C9、蛋白PZP、蛋白ANXA11。

本发明还提供一种血清胰腺癌外泌体特异蛋白的再验证过程，其特征在于，包括以下步骤：S1、分离血清样品中的无外泌体血清与外泌体；S2、采用步骤S1分离得到的外泌体，制备出外泌体PBS溶液；S3、通过透射电子显微镜来检查外泌体的超微结构；S4、通过蛋白质印迹分析来检测一些外泌体表面标志物蛋白的表达。

进一步的，所述步骤S1、分离血清样品中的无外泌体血清与外泌体，具体包括以下过程：将血清样品解冻并在4℃下以小高速离心机10000g离心30分钟，从而除去样品中的非外泌体微泡；将去除非外泌体微泡后的上清液以小高速离心机110000g离心70分钟后，将无外泌体血清分离至另一试管保存待检，外泌体沉淀重悬于4ml PBS中。

进一步的，所述步骤S2、制备出外泌体PBS溶液，具体包括以下过程：将步骤S1所得的外泌体重悬液在4℃下以小高速离心机110000g超速离心70分钟，使悬浮液中外泌体沉淀；将最终的外泌体沉淀重悬于200μl的PBS中，得到外泌体PBS溶液。