[发明专利]一种大量提取转化粪便DNA的方法

权利要求书

1.一种大量提取粪便DNA的方法，包括以下步骤：

1）取5~35 mL Buffer SPB至离心管中，所述Buffer SPB包括10~500 mM EDTA、10~500mM Tris、50~500 mM NaCl和10~70%无水乙醇，再取1~5 g粪便样本至管中，充分振荡混匀；

2）先加入50~1000 μL Buffer SLS，所述Buffer SLS包括10~500 mM EDTA、10~500 mMTris和10~20% SDS，颠倒混匀，再加入50~500 μL蛋白酶K，颠倒混匀后置恒温水浴锅56~75℃水浴5~30 min；

3）将离心管转至室温水浴1~5 min，8000~12000 g离心1~3 min；

4）取2~6 mL上清于新的离心管中，加入1~2 mL Buffer SDL，所述Buffer SDL包括10~500 mM EDTA、10~500 mM Tris、0.5~5% PVP10和0.5~3.5 M醋酸钠，上下颠倒混匀，8000~12000 g离心1~3 min；

5）取全部上清于新的离心管中，再加2~5 mL有机溶剂，上下颠倒混匀，10000~14000 g离心5~15 min，弃上清；所述的有机溶剂为异丙醇或乙醇；

6）往离心管加入100~800 μL Buffer DTE，所述Buffer DTE包括10~20 mM Tris和5~10mM的EDTA，涡旋混匀至沉淀散开；

7）10000~14000 g离心1~5 min，吸取全部液体至离心管；

8）加入200~800 μL Buffer DBB和300~700 μL无水乙醇，所述Buffer DBB包括10~500mM EDTA、10~500 mM Tris及4~6 M胍盐，胍盐包括异硫氰酸胍或盐酸胍中的至少一种，充分振荡混匀；

9）将混合液体加到纯化柱中，10000~14000 g离心30~60 s，倒去收集管中液体；

10）将剩余液体全部转移至纯化柱中，10000~14000 g离心30~60 s，倒去收集管中液体；

11）加入500~750 μL Buffer DW1于纯化柱中，所述Buffer DW1包括150~400 mM Tris，40~100 mM的EDTA，2~5 M异硫氰酸胍以及40~70%乙醇，10000~14000 g离心30~60 s，倒去收集管中液体；

12）加入500~750 μL Buffer DW2于纯化柱中，所述Buffer DW2包括300~700 mM Tris，0.8~1.2 M的NaCl以及70~90%乙醇，10000~14000 g离心30~60 s，倒去收集管中液体；

13）换用新的收集管，10000~14000 g离心1~5 min；

14）丢弃收集管，将纯化柱放置于新的离心管中；

15）滴加30~200 μL Buffer DTE于纯化柱膜上，所述Buffer DTE包括10~20 mM Tris和5~10 mM EDTA，50~70℃孵育1~5 min；

16）10000~14000 g离心1~5 min，得到粪便DNA。