[发明专利]一种通用型狂犬病相关病毒G蛋白胞外段的制备方法

说明书

本发明公开了一种通用型狂犬病相关病毒G蛋白胞外段的制备方法，属于蛋白质工程和生物制品技术领域。基于本发明的方法所制备的蛋白具有可溶、纯度高和溶液中性质均一等优点，纯化后纯度可达99％以上，突破了现有的狂犬病相关病毒G蛋白一直未能成功在体外重组表达这一瓶颈问题，在疫苗制备和中和抗体筛选等方面均具有重要的潜在应用价值。

技术领域

本发明涉及一种通用型狂犬病相关病毒G蛋白胞外段的制备方法，属于蛋白质工程和生物制品技术领域。

背景技术

狂犬病毒和狂犬病相关病毒(lyssavirus)是一类重要的人兽共患致病原，属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)、狂犬病毒属(Lyssavirus)，其绝大多数病毒成员均能感染人类，引起狂犬病(rabies)或狂犬病样疾病(rabies-like disease)。随着基因组测序手段的发展和进步，越来越多的狂犬病相关病毒被相继发现和报道。按照国际病毒分类委员会(ICTV)在2018年对单股负链RNA病毒目(Mononegavirales)分类系统的最新数据，狂犬病毒属目前共包括16个病毒成员，分别是：RABV(rabies virus),KHUV(Khujand lyssavirus),BBLV(Bokeloh bat lyssavirus),ARAV(Aravan lyssavirus),EBLV-1(European bat1lyssavirus),EBLV-2(European bat 2lyssavirus),IRKV(Irkut lyssavirus),DUVV(Duvenhage lyssavirus),ABLV(Australian bat lyssavirus),GBLV(Gannoruwa batlyssavirus),LBV(Lagos bat lyssavirus),SHIBV(Shimoni bat lyssavirus),MOKV(Mokola lyssavirus),WCBV(West Caucasian bat lyssavirus),IKOV(Ikomalyssavirus),和LLEBV(Lleida bat lyssavirus)(见参考文献1)。我们通常所提及的狂犬病毒，又称为传统狂犬病毒，即RABV，是目前造成绝大多数人类狂犬病的致病原；而狂犬病毒属中的其他15种病毒可被统称为狂犬病相关病毒，亦能造成包括人类在内的众多哺乳动物发病，且每大概2-3年既有一种新的狂犬病相关病毒新成员被发现。

人们对狂犬病的记载和认识由来已久，然而时至今日，狂犬病仍然严重威胁着人们的生命财产安全。据世界卫生组织统计，全球每年有5-6万人死于狂犬病，目前临床上仍没有任何有效的治疗方法和手段，人一旦发病，几乎100％死亡，病死率是所有传染病中最高的。目前人类对抗狂犬病的唯一途径仍然是通过疫苗接种来预防病毒感染。随着世界卫生组织提出在全世界范围内消除狂犬病的目标以及狂犬疫苗的广泛应用，由RABV所引起的传统狂犬病发病率已经在多个国家和地区，尤其是发达国家和地区(如北美、欧洲等)，得到了较好的控制。但这里需要指出的是，目前已知的所有狂犬疫苗均是靶向RABV的，而随着RABV所引起的传统狂犬病发病率的下降，由其他狂犬病相关病毒所引起的人类疾病的报道则呈现逐年上升的趋势，而针对RABV之外的其他狂犬病相关病毒，目前仍没有任何可用于疾病预防的疫苗产品。

狂犬病毒和狂犬病相关病毒均为有囊膜包被的RNA病毒，病毒糖蛋白(glycoprotein,G)是病毒囊膜中的唯一蛋白组分，是介导病毒对宿主细胞表面受体识别的唯一分子，也是行使膜融合功能介导病毒侵入的唯一病毒组分，因此，在病毒致病中发挥决定性作用。同时作为唯一暴露于病毒表面的病毒蛋白，G蛋白还是病毒中和抗体的唯一靶点和疫苗的最重要抗原组分。因此，可溶且溶液中性质均一的G蛋白即可被用于疫苗制备，也可被用于中和抗体筛选等，具有重要的潜在应用价值。