[发明专利]一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法

权利要求书

1.一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将脑脊液离心分离，取上清加入外泌体沉降抽提试剂后，混匀，孵育过夜，离心去掉上清液后，重悬，得到脑脊液样本；

(2)在步骤(1)得到的脑脊液样本中加入PE标记的一抗，孵育后，加入外泌体分选试剂，混匀孵育，得到脑脊液标记样本；

(3)将PE包被的磁珠震荡混匀，加入步骤(2)得到的脑脊液标记样本，混匀后孵育，得到混合样本；

(4)将混合样本洗涤、吹打、置于磁场中，翻转后弃掉上清液；

(5)将步骤(4)得到的沉淀洗涤，加入外泌体解离液，混匀孵育，然后洗涤、吹打、置于磁场中，翻转后收集上清液，即为特定来源的外泌体。

2.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(1)中：脑脊液和外泌体沉降抽提试剂的体积比为5:1。

3.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(1)中：重悬采用PBS或蒸馏水。

4.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(2)中：PE标记的一抗为PE标记的CD11b、Neun或GFAP一抗。

5.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(2)中：加入PE标记的一抗后，样本的浓度为0.2-2μg/mL。

6.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(2)中：每毫升脑脊液样本加入25-100μL外泌体分选试剂。

7.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(3)中：每毫升脑脊液标记样本加入100μL磁珠。

8.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(4)中：洗涤液成分为D-PBS+0.2％无外泌体血清+1mM EDTA。

9.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(4)中：将样品放入磁力架内，拿起磁铁，整体翻转，倒掉上清液。

10.根据权利要求1所述的一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，其特征在于，步骤(5)中：每毫升样本加入外泌体解离液的体积≥100μL。