[发明专利]一种定量检测HBV核酸的方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种定量检测HBV核酸的方法及试剂盒，具体地，本发明利用实时荧光聚合酶链式反应技术对HBV DNA核酸鉴别并且进行定量的检测试剂盒，可广泛应用于HBV病毒引起的乙型肝炎的窗口期检测、临床诊断、科学研究、疗效跟踪，以及检验检疫和疫情防控等多个领域。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸的方法及试剂盒。

背景技术

乙肝病毒((hepatitis B virus,HBV)是目前已知可导致病毒性肝炎的病毒之一。全世界HBV感染者达20多亿，其中3.5亿是慢性乙肝病毒携带者。慢性病毒携带者发生并发症的风险较高，并发症包括：慢性肝炎、肝硬化与肝细胞性肝癌。血清学标志物通常作为急性或慢性HBV感染的诊断和/或预后指标。HBV感染最常见的标志物是HBV表面抗原(HBsAg)。尽管病毒携带者可清除HBsAg，并形成抗HBsAg抗体，但依然具有发生严重肝脏并发症的风险。HBVe抗原(HBeAg)通常是作为进展性肝病相关，活动性HBV复制的次要标志物使用。HBeAg清除障碍患者，晚期肝病风险增加。HBV变异株可失去产生HBeAg的能力，即使是患者处于肝炎活动期，也可出现所产生的HBeAg无法被测出的情况。因此，通过该标志物检测，进行疾病进展监测，具有一定的局限性，有研究报道，血清HBV DNA检测具有急性、慢性HBV感染预后预测价值。使用该方法，可进行HBsAg清除后HBV DNA检测，或血清学标志物缺失情况下的HBV检测。然而，目前为止，还未确立血清学标志物与HBV DNA拷贝之间的关系。可通过血清学标志物与肝脏酶活性检测结果，对HBV感染患者抗病毒治疗疗效进行评估。但最直接，最可靠的病毒复制检测方法是血清或血浆HBV DNA定量测定。研究显示，α-干扰素，拉米夫定，甘昔洛韦、阿德福韦酯治疗患者HBV DNA拷贝的迅速、持续性下降，是理想治疗疗效的一种可预测性因素。通过HBV DNA拷贝检测，可对拉米夫定耐药情况进行预测。因此，HBVDNA定量检测是一种有价值的工具，可与其他血清学标志物联用，用于对HBV感染者的管理。可通过应用核酸扩增技术，如多聚酶链反应(PCR),对血清与血浆中的HBV DNA进行定量测定。乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光法)应用PCR技术，EDTA抗凝血清与血清HBV DNA定量测定动态范围与灵敏性非常高。

乙肝五项检测并不能作为判断病毒是否复制的指标，而DNA检测通过扩增病毒核酸，对体内低水平的HBV病毒敏感，是判断病毒复制的常用手段。DNA是乙肝病毒感染最直接、特异性强和灵敏性高的指标，HBV DNA阳性，提示HBV复制和有传染性，HBV DNA越高表示病毒复制越多，传染性越强。乙肝病毒的持续复制是乙肝致病的根本原因，HBV的治疗主要是进行抗病毒治疗，根本目的是抑制病毒复制，促使乙型肝炎病毒DNA的转阴。DNA检测对确诊HBV和评估HBV治疗效果也具有十分重要的作用，可了解机体内病毒的数量、复制水平、传染性、药物治疗效果、制定治疗策略等并作为评估指标，也是唯一能帮助确诊隐匿性HBV感染和隐匿性慢性HBV的实验室检测指标。

目前市面上有很多公司均研发出通过实时荧光PCR定量检测血清或血浆HBV病毒核酸载量的试剂盒。乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光法)能准确检测的HBVDNA浓度最低检出限越低(95％确信率)，则灵敏度越高，越能及时检出HBV潜在感染者及对低水平HBV感染患者抗病毒治疗疗效进行有效评估，最低检出限仍然有可优化的空间。因此，本领域致力于开发灵敏度更高的HBV检测方法以满足临床需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高灵敏度、使用便捷的乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒及检测方法。

本发明的第一方面，提供了一种用于检测乙型肝炎病毒(HBV)的PCR引物对组，所述引物对组包括第一引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO.:1所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:2所示的反向引物。