[发明专利]一种鸡白痢沙门氏菌检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明提供了一种鸡白痢沙门氏菌检测试剂盒，它包含：鸡白痢沙门氏菌特异引物、PCR缓冲液、PCR enhancer、dNTP、DNA聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD；所述鸡白痢沙门氏菌特异引物的序列如SEQ ID NO.11‑12所示；所述PCR缓冲液含有200‑260摩尔份的Tris‑HCl、4‑8摩尔份的MgCl₂、50‑120摩尔份的(NH4)₂SO₄、90‑110摩尔份的KCl和1‑3体积份Triton X‑100；当所述KCl的量90‑110mmol时，所述Triton X‑100的量为1‑3ml。本发明还提供了对应的使用方法，对应的聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD的用量比例为(1‑30):1。本发明能特异、灵敏地检测鸡白痢沙门氏菌以及其他沙门氏菌，在禽类疾病防控上具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及细菌检测领域，尤其涉及一种鸡白痢沙门氏菌检测试剂盒和鸡白痢沙门氏菌的检测方法。

背景技术

沙门氏菌是常见的重要人兽共患病原菌，根据沙门菌对不同宿主的侵袭力差异可以分为广嗜性沙门氏菌和宿主专嗜性特异性沙门氏菌。鸡是沙门氏菌最主要的宿主，鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌仅感染鸡和火鸡，具有高度宿主适应性和宿主专嗜性，可以引起雏鸡急性败血症，导致很高的发病率和病死率；鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌血清型感染鸡群引起的，主要是存在于卵巢、睾丸、肝脏等器官，可由感染的父母代鸡传染给雏鸡。2周以下的雏鸡发病后死亡率可达40％-70％，受感染的雏鸡在4-7d死亡，急性时可在1-3d死亡。控制鸡白痢沙门氏菌病原传播最有效的措施是严格管理结合根除计划。因此，快速鉴定和清除感染的父母代鸡群至关重要。对病原菌及时、准确地检测和诊断是鸡场有效防治与净化沙门氏菌的重要手段。

国内外针对沙门氏菌属已建立的单重及多重PCR方法，多用于检测菌株的血清型、毒力因子或耐药基因，而针对沙门氏菌属中的鸡白痢沙门氏菌的快速检测和诊断手段报道较少。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种鸡白痢沙门氏菌检测试剂盒，它包含：鸡白痢沙门氏菌特异引物、PCR缓冲液、PCR enhancer、dNTP、DNA聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD；

所述鸡白痢沙门氏菌特异引物的序列如SEQ ID NO.11-12所示；

所述PCR缓冲液含有200-260摩尔份的Tris-HCl、4-8摩尔份的MgCl₂、50-120摩尔份的(NH4)₂SO₄、90-110摩尔份的KCl和1-3体积份Triton X-100；当所述KCl的量90-110mmol时，所述Triton X-100的量为1-3ml；

所述PCR enhancer含有2500-2800摩尔份甜菜碱、6-7.5摩尔份二硫苏糖醇、65-70体积份的DMSO和50-60质量份的BSA；当所述甜菜碱为2.5-2.8mol时，二硫苏糖醇为6-7.5mmol、DMSO为65-70ml、BSA为50-60mg。

进一步地，所述PCR缓冲液含有240摩尔份的Tris-HCl、4摩尔份的MgCl₂、110摩尔份的(NH4)₂SO₄、100摩尔份的KCl和2体积份Triton X-100；当所述KCl的量100mmol时，所述Triton X-100的量为2ml。

进一步地，所述PCR缓冲液是2倍浓度的缓冲液，其中含有：Tris-HCl 240mM、MgCl₂4mM、(NH₄)₂SO₄ 110mM、KCl 100mM、Triton X-100 0.2％(v)。