[发明专利]二价双特异性抗体及其制备方法、编码基因、宿主细胞、组合物

说明书

本发明涉及抗体药物技术领域，特别涉及二价双特异性抗体及其制备方法、编码基因、宿主细胞、组合物。该二价双特异性抗体包括：a)特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，和b)特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，即scFv1‑CL或CL‑scFv1；或者包括：c)特异性结合第一抗原的抗体的轻链和重链；和d)特异性结合第二抗原的抗体的轻链和重链。本发明的二价双特异性抗体与第一抗原分子及第二抗原分子的亲和力均较高，轻重链正确装配率高，且分子大小适中。

技术领域

本发明涉及抗体药物技术领域，特别涉及二价双特异性抗体及其制备方法、编码基因、宿主细胞、组合物。

背景技术

双特异性抗体(bispecific monoclonal antibody,BsAb)是一种人工制作出来的可以同时结合两种不同抗原的特殊抗体。双特异性抗体能够同时识别肿瘤靶细胞和免疫效应细胞，因此兼有抗体特异性和介导效应细胞的细胞毒作用的双重功能。双特异性抗体能将效应细胞聚集于肿瘤部位并激活效应细胞发挥抗肿瘤作用，其杀伤肿瘤细胞的作用机理包括细胞增殖、细胞因子释放、细胞毒性多肽和酶的调控。体内及临床研究证明双特异性抗体介导的免疫治疗可使部分动物的肿瘤缓解，临床上可使肿瘤患者病情减轻，延长生命。因此，双特异性抗体介导的免疫活性细胞在肿瘤治疗中的应用具有良好的前景。

双特异性抗体在自然状态下不存在，只能通过人工制备。本领域中双或多特异性抗体能够结合2种以上抗原，可以利用细胞融合、化学缀合或重组DNA技术产生。最近己经开发了广泛多样的重组双特异性抗体形式，例如通过融合例如IgG抗体形式和单链结构域的四价双特异性抗体(参见例如Co1oma,M.J.,等,Nature Biotech.15(1997)159-163；WO2001077342；和Morrison,S.L.,Nature Biotech.25(2007)1233-1234)。此外，还开发了能够结合2种以上抗原的诸多其他新型形式，其中抗体中心结构(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)不再保持如双抗体、三链抗体或四链抗体、minibodies和若干单链形式(scFv、Bis-scFv)(Holliger,P.,等，Nature Biotech.23(2005)1126-1136；Fischer，N.，和Léger，O.，Pathobio1ogy 74(2007)3-14；Shen,J.，等，Journa1 of Immunogica1 Methods 318(2007)65-74；Wu,C.，等.,Nature Biotech.25(2007)1290-1297)。

在一种方法中，利用细胞杂交瘤(quadroma)技术(见Mi1stein,C.和A.C.Cue11o,Nature，305(1983)537-40)生成了与天然抗体非常类似的双特异性抗体，所述细胞杂交瘤技术基于表达具有所需的双特异性抗体特异性的鼠单克隆抗体的两种不同杂交瘤细胞系的体细胞融合。因为在产生的细胞杂交瘤细胞系中的两个不同抗体重链和轻链的随机配对，所以生成至多10种不同抗体类型，其中只有一种是所需的功能双特异性抗体。由于存在错配副产物和显著降低的产率，其意味着需要复杂的纯化程序(参见例如Morrison,S.L.,Nature Biotech 25(2007)1233-1234)。一般地，如果使用重组表达技术，则相同的错配副产物问题仍存在。