[发明专利]二价双特异性抗体及其制备方法、编码基因、宿主细胞、组合物有效
| 申请号： | 201811622069.2 | 申请日： | 2018-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN111378045B | 公开（公告）日： | 2022-08-02 |
| 发明（设计）人： | 冯晓;金磊;王涛;郭洪瑞;刘爽;陈宇珩;韩宁;梁阳秋 | 申请（专利权）人： | 长春金赛药业有限责任公司 |
| 主分类号： | C07K16/46 | 分类号： | C07K16/46;C12N15/13;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 潘颖;赵青朵 |
| 地址： | 130012 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 二价 特异性 抗体 及其 制备 方法 编码 基因 宿主 细胞 组合 | ||
1.能够同时特异性结合PD-L1和CD47的二价双特异性抗体，其特征在于，其包括：
a1)特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，其连接顺序依次为重链IgG1恒定区CH1、铰链区部分序列、柔性肽和单链可变片段scFv；和
b1)特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其连接顺序依次为单链可变片段scFv和轻链恒定区CL；
其中，所述第一抗原为PD-L1，所述第二抗原为CD47，或者所述第一抗原为CD47，所述第二抗原为PD-L1；并且，特异性结合PD-L1的scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特异性结合CD47的scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；
或者包括：
a2)特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，其连接顺序依次为单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1和铰链区部分序列；和
b2)特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其连接顺序依次为轻链恒定区CL和单链可变片段scFv；
其中，所述第一抗原为PD-L1，所述第二抗原为CD47，或者所述第一抗原为CD47，所述第二抗原为PD-L1；并且，特异性结合PD-L1的scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特异性结合CD47的scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；
或者包括：
a3)特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，其连接顺序依次为重链IgG1恒定区CH1、铰链区部分序列和单链可变片段scFv；和
b3)特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其连接顺序依次为单链可变片段scFv和轻链恒定区CL；
其中，所述第一抗原为PD-L1，所述第二抗原为CD47，或者所述第一抗原为CD47，所述第二抗原为PD-L1；并且，特异性结合PD-L1的scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特异性结合CD47的scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；
或者包括：
a4)特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，其连接顺序依次为单链可变片段scFv、重链IgG1恒定区CH1和铰链区部分序列；和
b4)特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其连接顺序依次为轻链恒定区CL和单链可变片段scFv；
其中，所述第一抗原为PD-L1，所述第二抗原为CD47，或者所述第一抗原为CD47，所述第二抗原为PD-L1；并且，特异性结合PD-L1的scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特异性结合CD47的scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；
或者包括：
c1)特异性结合第一抗原的抗体的轻链和重链；和
d1)特异性结合第二抗原的抗体的轻链和重链，其中轻链可变区与柔性肽以及链接肽相连，重链可变区通过柔性肽以及链接肽与重链Fc片段相连，所述链接肽为LGGC或GGGC，其中一条重链的链接肽LGGC或GGGC与一条轻链的链接肽LGGC或GGGC的末端半胱氨酸残基能形成二硫键；
其中，所述第一抗原为PD-L1，所述第二抗原为CD47，或者所述第一抗原为CD47，所述第二抗原为PD-L1；并且，特异性结合PD-L1的抗体的轻链和重链中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特异性结合CD47的抗体的轻链和重链中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；
或者包括：
c2)特异性结合第一抗原的抗体的轻链和重链；和
d2)特异性结合第二抗原的抗体的轻链和重链，其中轻链可变区与链接肽相连，重链可变区通过链接肽与重链Fc片段相连，所述链接肽为LGGC或GGGC，其中一条重链的链接肽LGGC或GGGC与一条轻链的链接肽LGGC或GGGC的末端半胱氨酸残基能形成二硫键；
其中，所述第一抗原为PD-L1，所述第二抗原为CD47，或者所述第一抗原为CD47，所述第二抗原为PD-L1；并且，特异性结合PD-L1的抗体的轻链和重链中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特异性结合CD47的抗体的轻链和重链中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示。
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