[发明专利]一种快速单反应管提取长片段基因组DNA的方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201811619310.6 | 申请日： | 2018-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN111378646A | 公开（公告）日： | 2020-07-07 |
| 发明（设计）人： | 毛爱平;张海满;张建光 | 申请（专利权）人： | 北京贝瑞和康生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人： | 孟凡宏;王月 |
| 地址： | 102299 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 反应 提取 片段 基因组 dna 方法 试剂盒 | ||
1.一种提取长片段基因组DNA的方法，包括以下步骤：
a)向样品中加入裂解液和蛋白酶K，使细胞裂解并释放基因组DNA；
b)向步骤a)的反应体系中加入沉淀剂，获得基因组DNA的沉淀；
c)用清洗液洗涤所得的基因组DNA的沉淀；
d)用溶解液溶解基因组DNA。
2.权利要求1所述的方法，其中所述样品是动物来源的组织或细胞。
3.权利要求1所述的方法，其中所述样品是来自胚胎组织、肝脏组织、胸腺组织、脾脏组织或体液的细胞，或体外培养的细胞系。
4.权利要求3所述的方法，其中所述体液选自血液、血清、血浆、关节液、精液、尿液、汗液、唾液、粪便、脑脊液、腹水、胸水、胆汁和胰腺液。
5.权利要求1所述的方法，其中所述裂解液包含NaCl、Tris-HCl、EDTA和SDS。
6.权利要求5所述的方法，其中所述SDS的浓度为0.1％-8％。
7.权利要求5所述的方法，其中所述裂解液包含RNAse A。
8.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白酶K的浓度为0.005-4mg/ml。
9.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白酶K和裂解液依次加入或同时加入。
10.权利要求1所述的方法，其中所述沉淀剂包含至少一种无机盐和至少一种醇类。
11.权利要求10所述的方法，其中所述无机盐选自醋酸铵、醋酸钠和氯化钠。
12.权利要求10所述的方法，其中所述醇类选自无水乙醇和异丙醇。
13.权利要求1所述的方法，其中所述清洗液包含70％乙醇。
14.权利要求1所述的方法，其中所述溶解液选自去离子水、Tris-HCl和TE缓冲液。
15.权利要求1所述的方法，其中所述方法在单个反应管中进行。
16.权利要求1所述的方法，其中所述长片段基因组DNA的长度可达Mb级别。
17.一种提取长片段基因组DNA的试剂盒，包含：裂解液、蛋白酶K、任选的RNAse A、沉淀剂、清洗液和溶解液。
18.权利要求17所述的试剂盒，其中所述裂解液包含NaCl、Tris-HCl、EDTA和SDS。
19.权利要求18所述的试剂盒，其中所述SDS的浓度为0.1％-8％。
20.权利要求17所述的试剂盒，其中所述裂解液包含RNAse A。
21.权利要求17所述的试剂盒，其中所述蛋白酶K的浓度为0.005-4mg/ml。
22.权利要求17所述的试剂盒，其中所述沉淀剂包含至少一种无机盐和至少一种醇类。
23.权利要求22所述的试剂盒，其中所述无机盐选自醋酸铵、醋酸钠和氯化钠。
24.权利要求22所述的试剂盒，其中所述醇类选自无水乙醇和异丙醇。
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