[发明专利]基于化学发光的可同时检测多种农兽药残留的生物芯片及检测方法

权利要求书

1.一种基于化学发光的可同时检测多种农兽药残留的生物芯片，其特征在于：所述生物芯片包括固定有一组检测目标物抗原的芯片载体，所述检测目标物为农药和/或兽药，所述生物芯片由以下方法制成：以牛血清白蛋白为空白对照，将牛血清白蛋白和检测目标物抗原通过生物芯片制备系统在芯片载体上点样操作后，于20-37℃水浴中孵育0.5-4h，洗涤后晾干即得。

2.根据权利要求1所述的一种基于化学发光的可同时检测多种农兽药残留的生物芯片，其特征在于，所述牛血清白蛋白和检测目标物抗原均使用CB缓冲液稀释，所述CB缓冲液配方：称取3.03g Na₂CO₃和6.00g NaHCO₃，用蒸馏水溶解并定容至500～2000mL。

3.根据权利要求1所述的一种基于化学发光的可同时检测多种农兽药残留的生物芯片，其特征在于，所述生物芯片为一组由检测目标物抗原的矩阵组成，所述矩阵的列数为3的倍数。所述的芯片载体为24孔板、96孔板、384孔板、透明高聚物片基、膜或玻片。

4.根据权利要求1所述的一种基于化学发光的可同时检测多种农兽药残留的生物芯片，其特征在于，所述的农药为有机氯类农药、有机磷类农药、拟除虫菊酯类农药、氨基甲酸酯类农药、烟碱类农药、甲草胺、乙草胺、百草枯、异菌脲中的任意一种或几种；所述的兽药为抗生素类、促生长类药物中的任意一种或几种。

5.一种利用权利要求1所述生物芯片同时检测农兽药残留的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)在生物芯片的部分反应孔内分别加入含有不同浓度梯度的检测目标物的混合标准溶液，在剩余反应孔内分别加入待测样品溶液，继续向所有反应孔中依次加入有标记物标记后的检测目标物所对应的抗体，于20～37℃水浴反应10～20min，洗涤液洗涤；

(2)向步骤(1)洗涤后的所有反应孔内继续加入显色剂；

(3)使用CCD进行图像采集，根据检测目标物阵列点的化学发光信号值以及标准溶液的浓度对数制作标准曲线，采用外标曲线法定量，分别计算样品溶液中检测目标物的含量。

6.根据权利要求5所述的同时检测农兽药残留的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述标记物为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。

7.根据权利要求5所述的同时检测农兽药残留的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述显色剂为过氧化物-鲁米诺体系、过氧化物-异鲁米诺及其衍生物体系、过氧化物-吖啶酯及吖淀酰胺类体系、(金钢烷)-1，2-二氧乙烷及其衍生物。

8.根据权利要求5所述的同时检测农兽药残留的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的待测样品为动物源性样品和植物源性样品，其中，所述的动物源性样品包括牛奶、奶粉、奶酪、饲料、尿液、动物组织、血清、蜂蜜、蜂皇浆、鸡蛋和水产品；所述的植物源性样品包括水果、蔬菜。

9.根据权利要求5所述的同时检测农兽药残留的方法，其特征在于，步骤(1)中，待测样品溶液的制备方法为：当待测样品为液体时，取50μL～1mL于10mL EP管中，用缓冲液稀释10～100倍即得待测样品溶液；当待测样品为固体时，取粉碎样品5g，加入8mL缓冲液，混合2～5min，置50℃水浴下放置10～30min，离心5～10min，取50μL上清液，加入450μL缓冲液混匀，取50μL～500μL即得待测样品溶液。

10.根据权利要求5所述的同时检测农兽药残留的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述检测目标物的混合标准溶液加入体积为10～200μL；所述待测样品溶液的加入体积与游离农药和兽药的标准溶液的加入体积相同；每个反应孔内加入的标记后的抗体的量10～200μL；不同反应孔内加入的抗体的量相同，不同反应孔内加入的标记的羊抗鼠IgG的量相同；所述的洗涤液为磷酸盐缓冲液和Tris缓冲液。