[发明专利]基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法及应用

权利要求书

1.一种基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将收集的弓形虫速殖子用氯仿-甲醇-水的提取液悬起，进行超声波破碎，得到第一悬浮液；

步骤2，将所述第一悬浮液离心后收集有机相，并用氮气吹干所述有机相，使所述有机相得以浓缩，进而用甲醇溶液复溶浓缩后的有机相，过滤后得待测样品；

步骤3，将所述待测样品通过色谱柱中的流动相洗脱进行分离后，然后分别在正、负离子模式下使用四极杆飞行时间高分辨质谱仪进行测定，根据目标脂类分子的化学式和相对分子量，将检测数据与之比对，鉴定得到弓形虫的多种脂类分子。

2.如权利要求1所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，步骤1中，所述收集的弓形虫速殖子的个数不低于1×10⁸个。

3.如权利要求1所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，步骤1中，所述氯仿-甲醇-水提取液中的氯仿：甲醇：水的体积比为(0.8-1.2)：(0.8-1.2)：(0.3-0.5)。

4.如权利要求1所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，步骤2中，复溶浓缩后的有机相的甲醇溶液的使用体积为48-52μl。

5.如权利要求1所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，步骤3中，所述色谱柱为液相C18色谱柱，该液相C18色谱柱的内径为2.1mm，长度为100mm，其内的固定相颗粒粒径为2.6um。

6.如权利要求5所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，所述液相C18色谱柱为Kinetex C18色谱柱。

7.如权利要求1所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，步骤3中所述待测样品通过色谱柱中的流动相洗脱的方式是利用流动相A和流动相B进行洗脱；

其中，所述流动相A包括乙腈、水、甲醇以及乙酸铵，所述乙腈：水：甲醇的体积比为(18-22)：(58-62)：(18-22)，所述乙酸铵的浓度为4-6mM；

所述流动相B包括异丙醇、乙腈以及乙酸铵，其中异丙醇：乙腈的体积比为(88-92)：(8-12)，所述乙酸铵的浓度为4-6mM。

8.如权利要求7所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，色谱柱的使用条件为：将所述待测样品的进样体积设置为5μl，柱温40℃，流速0.4mL/min；梯度洗脱程序具体如下：

第一步：进样，所述进样的时间设置为：0-0.5min；

第二步：梯度洗脱，首先将流动相A：B的体积比调节为80：20，洗脱0.5-1.5min；其次将流动相A：B的体积比调节为60：40，洗脱1.5-3min；再次将流动相A：B的体积比调节为40：60，洗脱3-4.5min；接着将流动相A：B的体积调节为10：90，洗脱2min；然后稳定维持在流动相B洗脱至第17min。

9.如权利要求1所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法，其特征在于，使用四极杆飞行时间高分辨质谱仪进行测定的质谱条件为：电喷雾离子源，分别采用正、负两种模式采集，气帘气35psi，雾化气55psi，脱溶剂气55psi，富集时间0.25s，质荷比范围100-2000，气体温度500℃；电喷雾离子源于正离子模式下，碰撞能量40V，去簇电压100V，雾化电压(ISVF)4000V；电喷雾离子源于负离子模式下，碰撞能量-40V，去簇电压-100V，雾化电压-4000V。

10.权利要求1所述的基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法在快速检测弓形虫不同脂类分子中的应用。