[发明专利]一种血管内皮生长因子的检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种血管内皮生长因子检测试剂盒及检测方法，本发明的试剂盒包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒、生物素标记的VEGF抗体、化学发光标记物标记的VEGF抗体、VEGF标准品、化学发光预激发液、化学发光激发液、清洗液。采用该试剂盒进行检测，灵敏度高、反应时间短、操作简单，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种蛋白免疫检测方法，关于一种基于电化学发光原理用于血管内皮生长因子(VEGF)检测的试剂盒及方法。

背景技术

肿瘤细胞的生长、转移依赖新生血管的形成，血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)是最有效的促血管生长因子(Ferraraetal.Endocr.Rev.1997，18：4-25)。血管内皮生长因子是近些年研究较为广泛的一种全新广谱肿瘤标记物(Cancer biomarker)，被认为是最有意义的血液肿瘤筛查的标记物。根据本公司的研究成果和国外的文献报道血管内皮生长因子检测试剂盒有四大功能：VEGF血液学检测可作为(1)肿瘤的筛查、(2)肿瘤的辅助诊断(Kondo S，Biochim BiophysActa.1994Mar 31；1221(2)：211-4)、(3)肿瘤治疗疗效的评估和监测、(4)肿瘤预后、以及复发的监测(Marpg D Clin Cancer Res April2，2013；DOI：10.1158/1078-0432.CCR-12-3409)。

VEGF相对分子量为45kDa，是由二硫键连接的糖蛋白二聚体，由同一N端而其他区域有某些差异的两条多肽链组成。VEGF基因位于染色体6p21.3，该基因经过转录水平的剪切，可产生5种不同的转录子，分别编码23，121，165，186和206个氨基酸多肽，VEGF是一种典型的外分泌蛋白。VEGF分解的单体无活性，去除N 2糖基对生物效应无影响，但可能在细胞分泌中起作用。血管内皮细胞生长因子基因由8个外显子和7个内含子组成，定位于染色体6p21.3，由于外显子剪切的不同而形成不同的亚型，产生出分别VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF185、VEGF206等至少5种蛋白形式，其中VEGF121、VEGF145、VEGF165是分泌型可溶性蛋白，在人类中表达，能直接作用于血管内皮细胞促进血管内皮细胞增殖，增加血管通透性。

近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。用于检测血清学指标的方法主要包括放射性同位素免疫分析、酶联免疫吸附法、和化学发光免疫分析。这些方法既可以作为初筛试验也可以作为确认试验，其中化学发光法具有检测线性范围宽、检测仪器简单、操作方便等优点。

中国专利201510115025.0公开了一种血管内皮生长因子检测试剂盒及其原料制备，公开了以链霉亲和素包被，加入生物素化的VEGF单抗，与标本中抗原反应后形成亲和素-抗体-抗原复合物，再加入另一株HRP酶标记的VEGF单抗，最终形成亲和素-生物素化抗体-抗原-HRP标记抗体复合物。不过采用该方法实现的检测发光强度不够高，影响检测效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血管内皮生长因子检测试剂盒及检测方法，发光强度高、操作简单，具有良好的应用前景。

一种血管内皮生长因子的检测试剂盒，包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒、生物素标记的VEGF抗体、化学发光标记物标记的VEGF抗体、VEGF标准品、化学发光预激发液、化学发光激发液、清洗液。

优选地，所述化学发光标记物为吖啶酯或吖啶酯衍生物，所述吖啶酯衍生物包括吖啶酯酸-NHS酯、吖啶酸丙磺酸钠盐或9-吖啶羧酸。