[发明专利]呼吸道病原体的多重PCR检测试剂盒、用途及其使用方法

说明书

本发明提供了呼吸道病原体的多重PCR检测试剂盒、该试剂盒的用途以及该试剂盒的使用方法，PCR检测试剂盒中包括扩多种引物及探针的混合物，PCR反应液，PCR酶液，内质控品以及核酸提取试剂，该检测试剂盒用于检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感1、副流感II、副流感III、腺病毒、偏肺病毒和肠道或者鼻病毒中的一种或者多种病原体，使用该试剂盒首先需要采样再需要PCR扩增以及检测，最后得出检测结果，采用本试剂盒中的核酸提取试剂、引物对、探针、PCR程序、PCR反应液和PCR酶液的结合、协同，最后达到缩短检测时间、检测灵敏度好以及特异性好的技术效果。

技术领域

本发明属于核酸扩增技术领域，主要涉及一种用于检测呼吸道病原体的试剂盒，用途及其使用方法。

背景技术

呼吸道感染在临床上极为常见，但由于引起呼吸道感染的病原体种类多种多样，快速准确对病原体进行鉴定对于临床诊疗以及防止药物滥用具有重要意义。基于Taqman探针的荧光定量PCR技术能够特异性对病原体核酸分子进行大量扩增，同时利用荧光信号的积累实现阴阳性结果判读。相比于生化指标及免疫方法，分子诊断灵敏度极高，能够基于不同病原体基因序列的差异性实现病原体种类鉴定以及亚型区分，在疾病的诊疗中具有明显优势。

然而，传统分子诊断方法的一些问题阻碍了该方法在呼吸道病毒感染中的大规模使用。首先是检测流程偏长，分子诊断操作复杂，涉及到核酸提取以及产物扩增，如何简化操作流程，节省实验时间，对于患者迅速得到正确治疗具有重要意义；其次是目前分子诊断测试多为单重体系，检测项目有限，但是呼吸道病毒种类繁多，单单是引起普通感冒最为常见的鼻病毒就有约145种血清型，单重PCR体系常常会出现患者测试结果为阴性情况，无法对患者给与有价值的信息，目前国内外对呼吸道病原体检测方法有很多种，它们各有优缺点，检测技术包括传统的分离培养法、免疫学检测技术以及新兴的分子生物学技术，以核酸为基础的分子检测方法以其快速、灵敏、特异以及省时省力的特点，成为呼吸道病原体检测的革命性技术，多重PCR是指在同一反应体系中，加入多对特异性引物，于此同时，如何让加入的引物不互相干扰并且其检测灵敏度也不低于单项PCR检测灵敏度成为一大技术难点，并且在遇到病危或者紧急情况下，如何提高整个检测过程的效率，让病人得到及时准确的治疗成为一种紧急需求，因此，开发一种快速、检测灵敏度高、具有良好重现性的多重检测呼吸道病原体感染的PCR检测试剂盒具有明确的临床意义及潜在应用价值。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种快速、检测灵敏度高、具有良好重现性的多重检测呼吸道病原体感染的PCR检测试剂盒。

本发明提供了一种呼吸道病原体的多重PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感1、副流感II、副流感III、腺病毒、偏肺病毒和肠道或者鼻病毒中的一种或者多种病原体的引物对及探针的混合物。

进一步的，本发明中的引物对如下所示：

由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的两条序列组成的引物对，所述引物对针对甲型流感病毒；

由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的两条序列组成的引物对，所述引物对针对乙型流感病毒；

由SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的两条序列组成的引物对，所述引物对针对呼吸道合胞病毒；

由SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的两条序列组成引物对，所述引物对针对副流感I；

由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示的两条序列组成的引物对，所述引物对针对副流感II；

由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的两条序列组成的引物对，所述引物对针对副流感III；