[发明专利]一种FMD抗原增强培养基及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种FMD抗原增强培养基及其制备方法与应用，培养基包括：氨基酸、无机盐、维生素及水解物，还包括：细胞周期阻断剂、糖类、双肽及小分子肽；培养基的制备方法包括：称取、溶解、过滤并除菌等步骤；疫苗的制备包括:BHK‑21细胞的复苏、细胞的扩增培养、病毒接种、换液等工艺。本发明在现有技术的基础上，在培养基中加入了抗原增强因子即细胞周期阻断剂，并且在病毒培养的过程中，增加了一步换液工艺，提高了抗原的活性、增强病毒滴度，显著提高了疫苗的抗病毒效率。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，更具体地说是涉及一种FMD抗原增强培养基及其制备方法与应用。

背景技术

口蹄疫，简称FMD，是人和偶蹄兽的一种急性发热性高度接触性传染病，其临床症状表现为口腔粘膜、蹄部和乳房皮肤发生水泡和溃烂；口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一类传染性疾病，口蹄疫病毒属于小核糖核酸科。这种病毒已知有多个亚型，且多个亚型之间免疫原性不同，不能产生交叉免疫。

目前，FMD抗原的培养基中主要含有氨基酸类、糖类、维生素类及无机盐类等物质，在制备FMD疫苗的过程中，常常需要加入FMD抗原培养基，以提供适合FMD抗原繁殖的生长环境。但是现有的FMD抗原培养基在制备疫苗中的作用并不明显，得到的FMD的灭活抗原量并不理想。

因此，如何提供一种能显著增加FMD抗原量的培养基及其制备方法与应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种FMD抗原增强培养基及其制备方法与应用，在现有技术的基础上，在培养基中加入了抗原增强因子即细胞周期阻断剂，并且在病毒培养的过程中，增加了一步换液工艺，提高了抗原的活性、增强病毒滴度，从而显著提高疫苗的抗病毒效率。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种FMD抗原增强培养基，包括：氨基酸、无机盐、维生素及水解物，还包括：细胞周期阻断剂、糖类、双肽及小分子肽。

可选的，所述FMD抗原增强培养基还包括：硫辛酸、环庚三烯酚酮、酚红钠盐、F-68、还原型谷胱甘肽、次黄嘌呤钠盐、及丙酮酸钠中的一种或多种。

可选的，所述细胞周期阻断剂包括：胸苷、含羞草碱、阿非迪霉素、噻氯酯达唑、秋水仙碱中的一种或多种。

可选的，所述糖类包括D-葡萄糖及糖类衍生物。

可选的，所述双肽包括丙谷二肽和双甘肽。

可选的，所述小分子肽的分子量大小包括：3-50kd

可选的，所述多种水解物包括：棉籽水解物、酵母超滤物、大米水解物及麦麸水解物中的一种或多种。

一种FMD抗原增强培养基的制备方法，包括下述步骤：

1)按照体积比，称取上述原料，并将所述原料混合均匀，得到混合原料；

2)向容器中注入水至900ml，加入所述混合原料，轻微搅拌溶解；

3)向所述容器中加入碳酸氢钠，使其最终浓度为2.5g/L，轻微搅拌使之溶解，加注射用水至1L，得到初始培养基；

4)将所述初始培养基用0.2μm滤膜正压过滤除菌，得到FMD抗原增强培养基；

5)将所述FMD抗原增强培养基放置2-8℃下密闭避光保存。

可选的，在所述步骤3)之后、所述步骤4)之前还包括：用1mol/L氢氧化钠溶液或1moL/L盐酸溶液调节所述初始培养基的pH值至7.5-7.8。

一种FMD抗原增强培养基在制备FMD疫苗中的应用。

一种利用FMD抗原增强培养基制备疫苗的方法，包括下述步骤：