[发明专利]一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法

说明书

本发明涉及免疫学技术领域，具体公开了一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法，包括如下步骤：步骤a：胶体金溶液的制备；步骤b：抗铅离子单抗标记的胶体金溶液的制备；步骤c：喷金；步骤d：硝酸纤维素膜上包被C线与T线；步骤e：胶体金免疫试纸条的组装。本发明制备的铅离子的胶体金免疫试纸条可用于人体血液中铅离子的检测，解决了现有技术中对于人体内铅离子的检测存在的检测时间长、检测成本高的问题。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，具体涉及一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法。

背景技术

铅是一种对人体危害极大的有毒重金属。铅及其化合物进入机体后将对神经、造血、消化、肾脏、心血管和内分泌等多个系统造成危害，若含量过高则会引起铅中毒。随着工业市场的迅速发展，铅被广泛应用到各行各业，铅对环境的污染越来越重，对人体的健康危害也越来越大。目前铅主要是通过食物、饮用水、空气等方式影响人体健康。对于成年人，铅的入侵会破坏神经系统，消化系统，男性生殖系统且影响骨骼的造血功能，进而人出现头晕、乏力、眩晕、困倦、失眠、贫血、免疫力低下、腹痛、便秘、肢体酸痛、肌肉关节前、月经不调等症状。对于儿童，由于大脑正在发育，神经系统处于敏感期，在同样的铅环境下吸入量比成人高出好几倍，受害极为严重，因此小孩铅中毒则会出现发育迟缓、食欲不振、行走不便和便秘、失眠；还有的伴有多动、听觉障碍、注意不集中和智力低下等现象，严重者造成脑组织损伤，可能导致终身残废。铅进入孕妇体内则会通过胎盘屏障，影响胎儿发育，造成畸形，流产或死胎等。世卫组织已经把铅确定为引起重大公共卫生关注的十种化学品之一，要求各会员国采取行动，保护工人、儿童和育龄妇女的健康。

目前重金属铅的检测方法主要包括物理和化学法、酶联免疫吸附检测法。物理和化学法主要包括原子吸收分光光度法(AAS)、电感耦合等离子体质谱分析(ICP-MS)、电感耦合等离子体-原子发射光谱法(ICP-AES)、原子荧光光谱分析(AFS)等。这些方法的特点是灵敏、准确，但检测相对费力、费时、费用昂贵，需要进行大量的样品预处理，且样品的检测需在大型分析设备的室内进行，不能用于现场检测，对检测人员技术要求高。酶联免疫吸附检测法是利用抗体和抗原免疫学原理进行定性或定量分析，该方法比较简便快速，可同时处理大量样品。但存在价格昂贵，单次检测成本高等缺点。

发明内容

本发明意在提供一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法，以解决现有技术中对于铅离子的检测存在的检测时间长、检测成本高的问题。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条制备方法，包括如下步骤：

步骤a：胶体金溶液的制备：质量浓度为0.008～0.012％的氯金酸水溶液80～120mL，搅拌加热至沸腾后一次性快速加入质量浓度为0.8～1.2％的柠檬酸三钠水溶液，继续加热搅拌直至溶液呈酒红色，室温冷却后得含有胶体金颗粒的胶体金溶液，所述胶体金颗粒的粒径为10～30nm；

步骤b：抗铅离子单抗标记的胶体金溶液的制备：将步骤a中的胶体金溶液8～12mL离心后弃上清液，沉淀用pH为8.0～8.5的碳酸钾溶液重新悬浮；将铅离子单克隆抗体0.04～0.1mg加入到胶体金溶液中，搅拌均匀后静置；逐滴加入质量浓度为8～12％的无菌牛血清蛋白，搅拌后室温下静置过夜得标记后的胶体金溶液；将标记后的胶体金溶液再次离心，弃上清液，沉淀用4～6mL重悬液复溶，重悬液的组成为0.01-0.03mol/L磷酸盐、质量浓度为3％-8％的牛血清蛋白、质量浓度为0.1％-0.3％的吐温20和质量浓度为5％-15％的蔗糖，得到铅离子单克隆抗体标记的胶体金溶液；

步骤c：喷金：将步骤b所得的铅离子单克隆抗体标记的胶体金溶液按6-15μL/cm的喷量喷在结合垫上，烘干后得喷金后的结合垫；