[发明专利]一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法

权利要求书

1.一种铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤a：胶体金溶液的制备：质量浓度为0.008～0.012％的氯金酸水溶液80～120mL，搅拌加热至沸腾后一次性快速加入质量浓度为0.8～1.2％的柠檬酸三钠水溶液，继续加热搅拌直至溶液呈酒红色，室温冷却后得含有胶体金颗粒的胶体金溶液，所述胶体金颗粒的粒径为10～30nm；

步骤b：抗铅离子单抗标记的胶体金溶液的制备：将步骤a中的胶体金溶液8～12mL离心后弃上清液，沉淀用pH为8.0～8.5的碳酸钾溶液重新悬浮；将铅离子单克隆抗体0.04～0.1mg加入到胶体金溶液中，搅拌均匀后静置；逐滴加入质量浓度为8～12％的无菌牛血清蛋白，搅拌后室温下静置过夜得标记后的胶体金溶液；将标记后的胶体金溶液再次离心，弃上清液，沉淀用4～6mL重悬液复溶，重悬液的组成为0.01-0.03mol/L磷酸盐、质量浓度为3％-8％的牛血清蛋白、质量浓度为0.1％-0.3％的吐温20和质量浓度为5％-15％的蔗糖，得到铅离子单克隆抗体标记的胶体金溶液；

步骤c：喷金：将步骤b所得的铅离子单克隆抗体标记的胶体金溶液按6-15μL/cm的喷量喷在结合垫上，烘干后得喷金后的结合垫；

步骤d：硝酸纤维素膜上包被C线与T线：其中C线为质控线，包被羊抗鼠IgG(免疫球蛋白G)，浓度为0.5-1.5mg/ml；T线为检测线，包被铅的检测抗原Pb²⁺-iEDTA(1-(4-异硫氰苄基)乙烯基二胺-N,N,N',N'-四乙酸)-BSA(牛血清蛋白)，浓度为0.1-1.0mg/ml；37℃-45℃抽风烘干，时间为1-24h，得到包被后的硝酸纤维素膜；

步骤e：胶体金免疫试纸条的组装：将全血专用样品垫、喷金后的结合垫、包被后的硝酸纤维素膜和吸水纸以依次相连的方式粘贴在聚氯乙烯底板上进行组装，切割成条，得到铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条。

2.根据权利要求1所述的一种铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条制备方法，其特征在于：步骤b中胶体金溶液离心时，转数为9000～11000r/min，离心时间为10～30min。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法，其特征在于：步骤b中的铅离子单克隆抗体标记的胶体金溶液于4℃下保存备用。

4.根据权利要求3所述的一种铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条制备方法，其特征在于：步骤c中的结合垫为玻璃纤维结合垫。

5.根据权利要求4所述的一种铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条制备方法，其特征在于：所述T线位于靠近全血样品垫的一端。

6.根据权利要求1-5任一所述方法制备的铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条，其特征在于：包括底板，底板上依次连接有全血样品垫、喷金后的结合垫、包被后的硝酸纤维素膜和吸水纸，所述喷金后的结合垫上喷涂有6-15μL/cm的胶体金颗粒粒径为10-30nm的胶体金溶液。

7.根据权利要求6所述的铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条在血液中铅离子检测上的应用。

8.根据权利要求7所述的铅离子胶体金免疫层析快速检测试纸条在血液中铅离子检测上的应用，其特征在于：待检测的血液在检测前按照1:1的体积比加入摩尔浓度为0.5-1.5mmol/L的iEDTA-BSA，混合均匀。