[发明专利]生物体肝脏组织中脂质的提取和检测方法

权利要求书

1.一种生物体肝脏组织中脂质的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

取肝脏组织进行组织匀浆；加入甲基叔丁基醚和甲醇进行脂质萃取；取上层有机相再次加入甲基叔丁基醚和甲醇二次萃取；取上层有机相，完成脂质提取。

2.根据权利要求1所述的生物体肝脏组织中脂质的提取方法，其特征在于，所述组织匀浆步骤包括：

准确称取肝脏组织于离心管中加水，离心管中加入钢球，间隔匀浆，间隔时冷却，匀浆后取出钢珠，得到均匀的肝脏组织匀浆液。

3.根据权利要求2所述的生物体肝脏组织中脂质的提取方法，其特征在于，加入钢球的数量为每离心管2～3个，组织匀浆时转速为2000～3000rpm，每次匀浆5～10s，间隔5～10s后再匀浆，反复匀浆10～12次，间隔时将离心管置于冰块中冷却。

4.根据权利要求1所述的生物体肝脏组织中脂质的提取方法，其特征在于，加入所述甲基叔丁基醚和甲醇的比例为5：1～6：1。

5.根据权利要求1所述的生物体肝脏组织中脂质的提取方法，其特征在于，所述萃取步骤包括：加入甲基叔丁基醚和甲醇后旋涡30～40s，超声10～20min，在3000～4000rpm转速下离心10～15min。

6.一种生物体肝脏组织中脂质的检测方法，其特征在于，利用权利要求1至5任一项所述的提取方法对生物体肝脏组织中的脂质进行前处理。

7.根据权利要求6所述的生物体肝脏组织中脂质的检测方法，其特征在于，对所述生物体肝脏组织中的脂质进行前处理后利用色谱-质谱联用方法进行脂质检测。

8.根据权利要求7所述的生物体肝脏组织中脂质的检测方法，其特征在于，将两次萃取后的上层有机相氮吹至干，加入甲醇复溶，在12300-13000rpm转速下离心1-2min，取上清液进样。

9.根据权利要求7所述的生物体肝脏组织中脂质的检测方法，其特征在于，使用QExactive高分辨液质联用仪进行检测。

10.根据权利要求9所述的生物体肝脏组织中脂质的检测方法，其特征在于，

色谱条件为：Hypersil Gold C18色谱柱，50mm×2.1m×1.9μm；柱温40℃；正离子模式：流动相A为乙腈:10mM甲酸铵水溶液，所述甲酸铵水溶液中含有0.1％甲酸，乙腈与甲酸铵水溶液的比例为1.5:1，流动相D为异丙醇：乙腈，异丙醇与乙腈的比例为9:1；负离子模式：流速为0.3mL/min；进样体积为2μL；流动相梯度为：流动相A为乙腈:10mM乙酸铵水溶液，乙腈与甲酸铵水溶液的比例为1.5:1，流动相D为异丙醇：乙腈，异丙醇与乙腈的比例为9:1；梯度洗脱程序：0min，85％A：15％D；0～2min，70％A：30％D；2～2.5min，52％A：48％D；2.5～11min，18％A：82％D；11～11.5min，1％A：99％D；11.5～12min，1％A：99％D；12～12.1min，85％A：15％D；12.1～15min，85％A：15％D。

质谱条件为：电离方式为电喷雾离子源，离子源温度为375℃，离子喷雾电压为3500V，鞘气流速为40arb，辅助气为10arb，反吹气为0，S-lens RF为50；辅助气压：10arb，喷雾气和碰撞气均为氮气，扫描方式采用Full MS/ddMS2+Discovery，正离子模式和负离子模式分别进样，此模式包含分辨率为70000的一级全扫描和数据依赖的分辨率为17500的二级扫描，扫描范围为100～1500m/z，一级扫描自动增益控制为1.0e6，离子注入时间为100ms；数据依赖的二级扫描自动增益控制设为1.0e5，最大离子注入时间设为100ms，隔离窗口设为3.0m/z，碰撞能量设为40eV，Loop count设为3，动态排除设为10.0s。