[发明专利]一种基于水溶性试剂的快速组织透明化的处理方法及其应用

权利要求书

1.一种基于水溶性试剂的快速组织透明化的处理方法，其特征在于：所述处理方法包括如下步骤：

S1、将经多聚甲醛固定过的组织放入组织膨胀处理剂中充分浸泡使其疏松膨胀，去除脂质；所述组织膨胀处理剂的组份包括间苯二甲胺和山梨醇，其余为水；所述间苯二甲胺、山梨醇的质量浓度分别为5％-20％、5％-15％；

S2、将步骤S1所得组织放入组织收缩剂中处理，使其由膨胀状态收缩回原始状态，并获得初步的透明效果；所述组织收缩剂的组份包括间苯二甲胺、山梨醇和磷酸盐缓冲液；组织收缩剂中间苯二甲胺、山梨醇的质量浓度分别为20％-40％、15％-30％，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M-0.05M；

S3、将步骤S2所得组织放入折射率匹配剂中浸泡，得到折射率相对均一的高度透明化的组织；所述折射率匹配剂的组份包括间苯二甲胺和山梨醇，其余为水；所述折射率匹配剂中间苯二甲胺、山梨醇的质量浓度分别为40％-60％、35％-50％。

2.根据权利要求1所述的基于水溶性试剂的快速组织透明化的处理方法，其特征在于：所述组织包括小鼠1-2mm厚的脑切片、小鼠全脑、小鼠心脏、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、胃、肠，或小鼠胚胎。

3.根据权利要求2所述的基于水溶性试剂的快速组织透明化的处理方法，其特征在于：步骤S1中，所述浸泡的时间根据组织类型分别为：1-2mm厚的脑切片0.5h-6h，小鼠全脑24-36h，小鼠心脏12-24h、肝脏24-36h、肾脏12-24h、肺脏12-24h、脾脏12-24h、胃6-12h、肠3-6h，小鼠胚胎4-8h；

步骤S2中，所述处理的时间根据组织类型分别为：1-2mm厚的脑切片0.5h-3h，小鼠全脑8-12h，小鼠心脏4-8h、肝脏8-12h、肾脏8-12h、肺脏8-12h、脾脏4-8h、胃4-8h、肠1-2h，小鼠胚胎1-2h；

步骤S3中，所述浸泡的时间根据组织类型分别为：1-2mm厚的脑切片0.5h-3h，小鼠全脑8-12h，小鼠心脏4-8h、肝脏8-12h、肾脏8-12h、肺脏8-12h、脾脏4-8h、胃4-8h、肠1-2h，小鼠胚胎1-2h。

4.如权利要求1-3任一项所述的基于水溶性试剂的快速组织透明化的处理方法的应用，其特征在于：将所述处理方法处理过的组织用于共聚焦成像、双光子成像或光片荧光显微成像中。