[发明专利]一种同时检测蛋白质和RNA的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种同时检测蛋白质和RNA的试剂盒，所述试剂盒包括固定液、胃蛋白酶、杂交液、封闭液、生物素化地高辛、荧光一抗、荧光二抗和DAPI复染封片剂；本发明还公开了一种同时检测蛋白质和RNA的方法。采用本发明的检测试剂盒和方法，能在同一组织或细胞水平同时检测蛋白质与RNA的共定位表达，通过荧光显微镜可直观的观察蛋白质与RNA的表达情况。

技术领域

本发明涉及生物大分子检测技术领域，尤其是一种同时检测蛋白质和RNA的试剂盒和方法。

背景技术

蛋白质免疫荧光技术是指用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法，用于检测或定位各种抗原。

RNA FISH(RNA荧光原位杂交)技术是将核酸探针的某一种核苷酸标记上一种报告分子(如生物素、地高辛)，利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测RNA进行定性、定量或相对定位分析的过程。RNA FISH可提供RNA在组织细胞的空间表达信息。

但是目前，临床上还不能在一个样品同时检测蛋白质和RNA的表达。现有技术无法结合蛋白质免疫荧光和RNA FISH技术，从而实现在同一组织或细胞水平同时检测蛋白质与RNA的共定位表达。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种同时检测蛋白质和RNA的方法，采用该方法能在同一组织或细胞水平同时检测蛋白质与RNA的共定位表达。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括以下内容：

在第一个方面，本发明提供了一种同时检测蛋白质和RNA的试剂盒，所述试剂盒包括固定液、胃蛋白酶、杂交液、封闭液、生物素化地高辛、荧光一抗、荧光二抗和DAPI复染封片剂。

优选地，所述固定液为4％(W/W)的多聚甲醛，其中含有1/1000(W/W)DEPC。

优选地，所述胃蛋白酶的使用浓度为5ug/ml。

优选地，所述杂交液含有0.01M PBS，0.05％(W/W)Tween，1％(W/W)羊血清和1％(W/W)BSA。

优选地，所述封闭液含有0.01M PBS，0.1％(W/W)Tween，2％(W/W)羊血清和1％(W/W)BSA。

优选地，所述生物素化地高辛为生物素化鼠抗地高辛。

优选地，所述荧光一抗为Alexa647标记的荧光一抗。

优选地，所述荧光二抗为SABC-FITC标记的荧光二抗。

在第二个方面，本发明提供了一种同时检测蛋白质和RNA的方法，包括如下步骤：

(1)取细胞爬片室温固定，固定液为4％(W/W)多聚甲醛，其中含有1/1000DEPC；

(2)暴露mRNA核酸片段：向步骤(1)所得细胞爬片上滴加柠檬酸稀释的胃蛋白酶，37℃或室温消化，清洗；

(3)预杂交：干的杂交盒底部加甘油以保持湿度，按每张步骤(2)所得细胞爬片加40μL杂交液，恒温箱40℃、2小时，之后吸取多余液体；

(4)杂交:用杂交液稀释地高辛标记的寡核苷酸探针，按每张步骤(3)所得细胞爬片加50μL杂交液，将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开，盖在切片上，恒温箱40℃杂交过夜；

(5)杂交后洗涤：40℃水温的2×SSC洗涤步骤(4)所得细胞爬片5分钟×2次；0.5×SSC洗涤15分钟×1次；0.2×SSC洗涤15分钟×1次；

(6)封闭：向步骤(5)所得细胞爬片加入封闭液，在37℃反应30分钟；