[发明专利]一种同时检测蛋白质和RNA的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种同时检测蛋白质和RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括固定液、胃蛋白酶、杂交液、封闭液、生物素化地高辛、荧光一抗、荧光二抗和DAPI复染封片剂。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固定液为4％(W/W)的多聚甲醛，其中含有1/1000(W/W)DEPC。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述胃蛋白酶的使用浓度为5ug/ml。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述杂交液含有0.01M PBS，0.05％(W/W)Tween，1％(W/W)羊血清和1％(W/W)BSA。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭液含有0.01M PBS，0.1％(W/W)Tween，2％(W/W)羊血清和1％(W/W)BSA。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素化地高辛为生物素化鼠抗地高辛。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光一抗为Alexa647标记的荧光一抗。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光二抗为SABC-FITC标记的荧光二抗。

9.一种同时检测蛋白质和RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取细胞爬片室温固定，固定液为4％(W/W)多聚甲醛，其中含有1/1000DEPC；

(2)暴露mRNA核酸片段：向步骤(1)所得细胞爬片上滴加柠檬酸稀释的胃蛋白酶，37℃或室温消化，清洗；

(3)预杂交：干的杂交盒底部加甘油以保持湿度，按每张步骤(2)所得细胞爬片加40μL杂交液，恒温箱40℃、2小时，之后吸取多余液体；

(4)杂交:用杂交液稀释地高辛标记的寡核苷酸探针，按每张步骤(3)所得细胞爬片加50μL杂交液，将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开，盖在切片上，恒温箱40℃杂交过夜；

(5)杂交后洗涤：40℃水温的2×SSC洗涤步骤(4)所得细胞爬片5分钟×2次；0.5×SSC洗涤15分钟×1次；0.2×SSC洗涤15分钟×1次；

(6)封闭：向步骤(5)所得细胞爬片加入封闭液，在37℃反应30分钟；

(7)向步骤(6)所得细胞爬片滴加生物素化鼠抗地高辛：37℃反应60min，避光；

(8)步骤(7)所得细胞爬片用PBS清洗后，荧光二抗用PBS稀释，向细胞爬片滴加稀释后的荧光二抗，之后37℃反应30分钟；

(9)步骤(8)所得细胞爬片用PBS清洗后，加入免疫荧光直标荧光一抗孵育60min，37℃、避光；之后PBS清洗，再利用含DAPI染色剂封片，然后用荧光显微镜观察细胞爬片，即得。