[发明专利]含有胰蛋白酶抑制剂的组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及酶工程领域，公开了含有胰蛋白酶抑制剂的组合物及其制备方法和应用。所述组合物含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10‑1250:0.1‑20:500‑100000:1。本发明公开的制备含有胰蛋白酶抑制剂的组合物的方法包括：混合VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶。本发明还公开了如上所述的组合物在从胰腺样品中分离单细胞中的应用。本发明能够实现单细胞的高收率和高活率提取，特别是胰腺组织，攻克了现有胰腺组织单细胞收率和活率较低的难题。

技术领域

本发明涉及酶工程领域，具体涉及含有胰蛋白酶抑制剂的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

胰腺是人体中兼具内分泌和外分泌功能的器官。组织学上包含胰岛细胞、腺泡细胞、导管细胞以及间质细胞等多个细胞组分。胰腺产生分泌的胰液中含有胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶等多种消化酶。随着近年来单细胞分析技术的兴起，人们对与人体组织器官的研究从不同成分混合，互相干扰的整体组织分析逐渐深入到对构成组织器官的单个细胞的研究，其重要性不言而喻。而在胰腺研究领域，由于胰腺器官大体上柔软而脆弱、组织学上成分复杂且因为强效的胰酶而容易发生自身消化，使得胰腺单细胞研究往往止步于第一步——也即可供分析的胰腺组织单细胞的获取。

人体或动物模型组织器官单细胞分离方法，从最初的毛细管吸取，到流式分选再到微流体技术，众多的单细胞分离技术在不同的组织当中或多或少都取得了较为满意的结果，但在胰腺组织上则差强人意。通过查阅文献可知，目前研究人员在分离小鼠胰腺癌单细胞时，大多采用以II型胶原酶为主的酶消化解离方法，但是，胰腺单细胞研究者均表示在胰腺单细胞分离时遇到了极大的挑战，要么单细胞收率不高，要么细胞活率较低，因此，开发能够有效分离的胰腺单细胞的制剂或方法具有极为重要的意义。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的单细胞收率和细胞活率较低的问题，提供含有胰蛋白酶抑制剂的组合物及其制备方法和应用。

为了实现上述目的，本发明一方面提供了一种含有胰蛋白酶抑制剂的组合物，该组合物含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10-1250:0.1-20:500-100000:1。

本发明第二方面提供了一种制备含有胰蛋白酶抑制剂的组合物的方法，该方法包括：混合VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10-1250-:0.1-20:500-100000:1。

本发明第三方面提供了如上所述的组合物在从胰腺样品中分离单细胞中的应用。

通过上述技术方案，本发明能够实现单细胞的高收率和高活率提取，特别是胰腺组织，攻克了现有胰腺组织单细胞收率和活率均较低的难题，为胰腺组织单细胞的分离指明了方向，有利于促进对胰腺组织的进一步研究。

附图说明

图1和图2是使用根据本发明具体实施方式的组合物从正常胰腺组织分离单细胞的结果图；

图3至图5分别是使用不同的参比组合物从正常胰腺组织分离单细胞的结果图。

具体实施方式

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。