[发明专利]含有胰蛋白酶抑制剂的组合物及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201811594176.9 | 申请日： | 2018-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN109762796A | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 吴文铭;彭俊雅;陈澔;黄丹;刘路路;洪夏飞;丛林;李冬晶;赵玉沛 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院北京协和医院 |
| 主分类号： | C12N9/16 | 分类号： | C12N9/16;C12N9/50;C12N9/64;C07K14/81;C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 刘依云;王崇 |
| 地址： | 100730 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胰蛋白酶抑制剂 脱氧核糖核酸酶 中性蛋白酶 胶原酶 制备方法和应用 胰腺组织 收率 酶活力单位 酶工程 胰腺 制备 应用 | ||
1.一种含有胰蛋白酶抑制剂的组合物，其特征在于，该组合物含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10-1250:0.1-20:500-100000:1，优选为50-625:0.5-10:2000-50000:1。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述中性蛋白酶为Dispase II；
和/或，所述脱氧核糖核酸酶为DNaseI。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述组合物还含有溶剂，相对于每毫克的VIII型胶原酶，所述溶剂的含量为0.1-12.5mL。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述溶剂为含有4-10体积％胎牛血清的磷酸盐缓冲液。
5.一种制备含有胰蛋白酶抑制剂的组合物的方法，其特征在于，该方法包括：混合VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为10-1250:0.1-20:500-100000:1，优选为50-625:0.5-10:2000-50000:1。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述中性蛋白酶为Dispase II；
和/或，所述脱氧核糖核酸酶为DNaseI。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其中，混合的方式为：先将VIII型胶原酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂预混，用溶剂溶解预混物，再往混合体系中引入脱氧核糖核酸酶；相对于每毫克的VIII型胶原酶，所述溶剂的用量为0.1-12.5mL。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述溶剂为含有4-10体积％胎牛血清的磷酸盐缓冲液。
9.权利要求1-4中任意一项所述的组合物在从胰腺样品中分离单细胞中的应用，特别是在制备用于从胰腺样品中分离单细胞的试剂盒中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述胰腺样品为正常胰腺组织和/或胰腺肿瘤组织。
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