[发明专利]一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法

权利要求书

1.一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法，所述的蛋白酶缺失微生物是枯草芽孢杆菌WB800，保藏于江南大学中国高校工业微生物资源和信息中心，CICIM编号为B0132，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1：菌种活化

将所述枯草芽孢杆菌WB800接种于活化培养基平板，置于培养箱内倒置培养以活化菌株；

S2：种子培养

挑取步骤S1活化后的单菌落接种于种子培养基，置于摇床震荡培养至种子液的OD600达到0.6～1.0；

S3：发酵产酶

将步骤S2中的种子液接入发酵培养基中，置于摇床震荡培养；

所述发酵培养基的配方为：壳寡糖20～30g/L，胰蛋白胨9～11g/L，酵母提取物4～6g/L，氯化钠9～11g/L，用氢氧化钠调节所述发酵培养基的pH，使其达到7.2～7.6；且所述壳寡糖是聚合度为2～10的壳聚糖部分水解的产物；

S4：离心分离

将步骤S3发酵后的产物进行离心，收集上清液，获得壳聚糖酶的粗酶液。

2.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法，其特征在于：所述种子液按体积百分比1.5～3％的接种量接入所述发酵培养基中。

3.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法，其特征在于，步骤S1中所述活化培养基的配方为：胰蛋白胨8～12g/L，酵母提取物3～7g/L，氯化钠7～11g/L，琼脂粉15～20g/L，用氢氧化钠调节所述活化培养基的pH为7.2～7.6。

4.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法，其特征在于，步骤S2中所述种子培养基的配方为：胰蛋白胨8～12g/L，酵母提取物3～7g/L，氯化钠7～11g/L，用氢氧化钠调节所述种子培养基的pH，使其达到7.2～7.6。

5.根据权利要求1～4中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法，其特征在于：步骤S1中，所述菌种活化的培养温度为35～39℃，时间为12～24h。

6.根据权利要求1～4中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法，其特征在于：步骤S2中，所述种子培养的温度为35～39℃，时间为12～16h，转速为180～220r/min。

7.根据权利要求1～4中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法，其特征在于：步骤S3中，所述发酵产酶的温度为35～39℃，时间为25～30h，转速为180～220r/min。

8.根据权利要求1～4中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法，其特征在于：步骤S4中，所述离心分离的时间为10～20min，转速为3000～5000r/min。