[发明专利]小鼠脑中神经细胞的提取分离方法

说明书

本发明公开了一种小鼠脑中神经细胞的提取分离方法，将离体小鼠脑部用酒精消毒后置于预冷无菌平衡盐溶液D‑hanks中；用手术刀将脑切碎，用0.15％(m/v)的木瓜蛋白酶液消化后，用含脱氧核糖核酸酶I的D‑hanks缓冲盐溶液吹打细胞后，过100μm滤网；然后用细胞分离液percoll差速离心去除髓鞘蛋白，得到单细胞悬液；用红细胞裂解液去除其中血红细胞；利用美天旎miltenyi的磁珠beads纯化得到各种类型的神经细胞。

技术领域

本发明属于细胞生物领域，具体涉及一种小鼠脑中神经细胞的提取分离方法。

背景技术

中枢神经系统(central nervous system,CNS)中的神经元和神经胶质起源于神经干细胞(neural stemcells,NSCs)。了解NSCs的神经/胶质细胞生成机制是理解复杂大脑结构和功能发展的基础。NSCs不仅存在于发育中的大脑中，而且存在于成人的成熟脑中。成人神经发生可能为成熟大脑提供显著的可塑性。最近精神障碍基础研究的进展表明，特别是大脑区域的神经/胶质细胞生成受损的病因学联系。

此外，来自NSCs的神经元和神经胶质可用于治疗退行性疾病和CNS创伤的发现引起了神经科学家和临床医生对干细胞生物学的广泛兴趣。胚胎干细胞(embryonic stemcell，ES)和诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPS cells)的最新进展为这些治疗方法提供了可能。此外，人们对神经/神经胶质细胞受损与精神疾病(包括情绪障碍和慢性压力综合征)之间的相关性以及最近在这些疾病状态的基础研究方面取得的进展表现出了进一步的兴趣。因此，更深入地了解神经干细胞和神经/神经胶质细胞的性质对于神经科学的各个方面包括脑结构和功能的发育，重塑和恢复至关重要。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种效率高、存活率高和纯度高的小鼠脑中神经细胞的提取分离方法。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种小鼠脑中神经细胞的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)将离体小鼠脑部用酒精消毒后置于预冷无菌平衡盐溶液D-hanks中；

(b)用手术刀将脑切碎，用0.15％(m/v)的木瓜蛋白酶液消化后，用含脱氧核糖核酸酶I的D-hanks缓冲盐溶液吹打细胞后，过100μm滤网；

(c)用细胞分离液percoll差速离心去除髓鞘蛋白，得到单细胞悬液；

(d)用红细胞裂解液去除其中血红细胞；

(e)利用美天旎miltenyi的磁珠beads纯化得到各种类型的神经细胞。

根据本发明，所述的小鼠为各个年龄段的小鼠，雌雄不限。

优选的，步骤(b)中所述木瓜蛋白酶消化酶液为预先在37℃预热5分钟，其浓度为0.15％(m/v)，消化时间为10-15分钟。

进一步优选的：

步骤(b)中所述脱氧核糖核酸酶I的浓度为1-3％(m/v)，吹打时间为5-10分钟。

步骤(c)中所述细胞分离液percoll的密度为70％和30％两种，其中，30％密度的细胞分离液percoll配方为含有浓度为30％含酚红的D-Hanks，且在差速离心时，升降速要求为1。

步骤(c)中所述的差速离心条件为2000rpm，时间20分钟，且在差速离心时，升降速要求为1。

步骤(d)中所述红细胞裂解液(Red Blood Cell,RBC)的体积为2ml/脑，裂解时间为1分钟。