[发明专利]小鼠脑中神经细胞的提取分离方法在审
| 申请号： | 201811580964.2 | 申请日： | 2018-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN109609457A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 张媛;冶泽青;李星;杨婷 | 申请（专利权）人： | 陕西师范大学 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 710062 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 神经细胞 小鼠 提取分离 去除 脱氧核糖核酸酶I 红细胞裂解液 木瓜蛋白酶液 单细胞悬液 缓冲盐溶液 平衡盐溶液 细胞分离液 手术刀 差速离心 酒精消毒 髓鞘蛋白 血红细胞 吹打 磁珠 离体 滤网 脑部 切碎 无菌 预冷 细胞 消化 | ||
1.一种小鼠脑中神经细胞的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)将离体小鼠脑部用酒精消毒后置于预冷无菌平衡盐溶液D-hanks中；
(b)用手术刀将脑切碎，用0.15％(m/v)的木瓜蛋白酶液消化后，用含脱氧核糖核酸酶I的D-hanks缓冲盐溶液吹打细胞后，过100μm滤网；
(c)用细胞分离液percoll差速离心去除髓鞘蛋白，得到单细胞悬液；
(d)用红细胞裂解液去除其中血红细胞；
(e)利用美天旎miltenyi的磁珠beads纯化得到各种类型的神经细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的小鼠为各个年龄段的小鼠，雌雄不限。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中所述木瓜蛋白酶消化酶液为预先在37℃预热5分钟，其浓度为0.15％(m/v)，消化时间为10-15分钟。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中所述脱氧核糖核酸酶I的浓度为1-3％(m/v)，吹打时间为5-10分钟。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)中所述细胞分离液percoll的密度为70％和30％两种，其中，30％密度的细胞分离液percoll配方为含有浓度为30％含酚红的D-hanks，且在差速离心时，升降速要求为1。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)中所述的差速离心条件为2000rpm，时间20分钟，且在差速离心时，升降速要求为1。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(d)中所述红细胞裂解液的体积为2ml/脑，裂解时间为1分钟。
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