[发明专利]一种雪旺细胞来源外泌体的用途、诱导剂和试剂盒

说明书

本发明涉及一种雪旺细胞来源外泌体的用途、诱导剂和试剂盒，本发明研究发现，雪旺细胞来源外泌体能够用于诱导骨髓间充质干细胞分化为雪旺细胞。本发明证明雪旺细胞来源外泌体可有效诱导骨髓间充质干细胞分化为雪旺细胞，可用于制备诱导骨髓间充质干细胞向雪旺细胞分化的诱导剂和试剂盒。

技术领域

本发明涉及医疗领域，特别涉及一种雪旺细胞来源外泌体的用途、诱导剂和试剂盒。

背景技术

临床上导致周围神经缺损的原因很多，如肿瘤切除、创伤等均可造成神经缺损，临床上治疗周围神经离断除及时的神经对位缝合外，一般常用自体神经移植来治疗，但是存在造成供区神经功能丧失、遗留手术疤痕及供体有限、供区的附加切口、移植神经支配区的功能障碍等问题，且并不能保证达到确实的修复效果，近年来，周围神经组织工程技术的兴起，为神经缺损的修复提供了新的方法和手段。

雪旺细胞因其在周围神经结构组成中的特殊地位和作用，一直是研究的重点，雪旺细胞能够促进轴突再生、促进再生轴突的髓鞘化，雪旺细胞还具有复神经支配作用，在周围神经组织工程修复中充当种子细胞，但临床应用中来源有限，细胞增殖时间较长，因此快速获得组织工程化人工神经所需要的雪旺细胞非常重要，目前国内外在此方面有较多的研究，但普遍存在着技术复杂、所需试剂昂贵、雪旺细胞纯度不高等不足。

发明内容

针对以上问题，本发明提供了一种雪旺细胞来源外泌体的用途、诱导剂及试剂盒，该用途、诱导剂和试剂盒可用于诱导骨髓间充质干细胞分化为雪旺细胞。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供了雪旺细胞来源外泌体在骨髓间充质干细胞分化为雪旺细胞中的应用。

本发明还提供了一种诱导骨髓间充质干细胞分化为雪旺细胞的方法，该方法为采用雪旺细胞来源外泌体诱导骨髓间充质干细胞分化为雪旺细胞。

进一步的改进，该方法具体为：在含有对数生长期骨髓间充质干细胞的α-MEM培养液中加入雪旺细胞来源外泌体，换液后再加入雪旺细胞来源外泌体培养骨髓间充质干细胞，共换液3次，每次培养3天。

其中，根据细胞生长情况，可以在培养过程中进行传代，传代后使用原培养液继续培养。

进一步的改进，该方法具体为：取对数生长期的骨髓间充质干细胞用pH值为7.4的PBS清洗三遍，加入含有0.5-1.5mmβ-巯基乙醇的α-MEM培养液孵育24h，再用含体积分数为5％-15％FBS和30-40ng/mL全反式维甲酸的α-MEM培养液孵育3d，更换为原始分化培养液，同时添加180-220μg/mL的雪旺细胞来源外泌体，孵育7-8d。

其中，在孵育过程中根据细胞生长情况，可以在培养过程中进行传代，传代后使用原培养液继续培养。

进一步的改进，对数生长期的骨髓间充质干细胞由如下方法制得：将骨髓间充质干细胞加入到α-MEM完全培养液中制备浓度为4-6×10⁷/ml的骨髓间充质干细胞悬液，取骨髓间充质干细胞悬液导入细胞培养瓶中，置于37℃、95％湿度和5％CO₂浓度条件下孵育3天后，倾去α-MEM完全培养液，用pH值为7.4的PBS溶液清洗去除未贴壁的骨髓间充质干细胞，更换新的α-MEM完全培养液培养至细胞融合度为70％-80％。

进一步的改进，原始分化培养液以α-MEM培养液为基础，添加8-12ng/mL的FBS、4-6μM的FSK、8-12ng/mL的b-FGF、4-6ng/mL的PDGF和180-220ng/mL的HRG-β1。

其中，FBS为胎牛血清，FSK为佛司可林，b-FGF为碱性成纤维生长因子，PDGF为血小板衍生生长因子。

本发明还提供了一种用于诱导骨髓间充质干细胞分化为雪旺细胞的诱导剂，该诱导剂含有雪旺细胞来源外泌体。