[发明专利]表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒及其应用

说明书

本发明公开了一株表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒及其应用。本发明首先公开了一株表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒ChS‑1株，其微生物保藏编号为：CGMCC No.16820。本发明进一步公开了所述重组杆状病毒ChS‑1株在制备预防猪圆环病毒3型的药物或试剂中的应用。本发明还公开了一种猪圆环病毒3型重组杆状病毒灭活疫苗的制备方法，包括：增殖重组杆状病毒ChS‑1株，表达猪圆环病毒3型Cap蛋白，收获抗原液；将抗原液灭活后与佐剂混合，乳化，即得。本发明所述重组杆状病毒ChS‑1株的Cap蛋白表达量高、病毒滴度高，所制备灭活疫苗的安全性及免疫效果好，能够用于猪圆环病毒3型的防控。

技术领域

本发明涉及一株表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒，还涉及所述重组杆状病毒在制备预防猪圆环病毒3型的药物或试剂中的应用，属于表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒的构建领域。

背景技术

猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属，是一种小而无囊膜、共价闭合、环状、单股DNA病毒，病毒粒子直径平均为17nm，是目前兽医学上发现的最小的动物病毒。

目前，PCV可分为3个基因型，即PCV-1、PCV-2和PCV3。PCV-1为非致病性PCV，PCV-2和PCV-3均对猪有致病性，可引起PMWS(断奶仔猪多系统衰竭综合征)，又称PMWS相关PCV。PCV-3是由Palinski等从患病母猪及流产胎儿体内首次鉴定，其基因组长2.0kb，随后世界上许多国家和地区都有该病的报道，中国学者对国内部分省区的PCV-3流行情况进行了调查，湛洋等对江苏、湖南、湖北疑似猪皮炎肾炎综合征的病猪组织样品进行PCV-3巢式PCR检测，结果在这些病料中检测到PCV-3的存在；贺会利等从广西某猪场腹泻死亡仔猪的病料样品中检测到PCV-3；刘晓东等对中国10个省区106份样品进行PCR检测，结果表明安徽、江西、山东、福建、河南和广西存在PCV-3阳性猪场，给中国的养猪业造成严重的经济损失。

目前，中国国内尚无猪圆环病毒3型疫苗。由于该病传播流行的快速以及其较高的致病性，应当引起养殖户以及兽医防控机构的高度重视，需要尽早开展针对该病研究。同时结合对PCV-2防控的成功经验，疫苗研制，尤其是新型的猪圆环病毒3型疫苗的研制，已是当务之急。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一株表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒ChS-1株；

本发明所要解决的第二个技术问题是提供所述表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒ChS-1株在制备预防或治疗猪圆环病毒3型的药物或试剂中的应用。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明从吉林、河北和山东疑似猪圆环病毒发病的病料中提取PCV3毒株DNA，然后用特异性引物分别扩增Cap蛋白基因(ORF2)，连接至载体pOET1构建获得重组质粒pOET1-ORF2-ChS-1、pOET1-ORF2-HaD-1和pOET1-ORF2-RiZ-1。本发明进一步将昆虫病毒DNA(flashBACPrime)与转移质粒(pOET1-ORF2-ChS-1、pOET1-ORF2-HaD-1和pOET1-ORF2-RiZ-1)分别共转染Sf9昆虫细胞，获得3株PCV3重组杆状病毒，分别命名为ChS-1株、HaD-1株和RiZ-1株。本发明对三株重组杆状病毒进行病毒滴度和表达量的测定，结果表明ChS-1株的病毒滴度达到8.2×10⁷pfu/ml，120小时上清中Cap蛋白含量达58.56μg/ml。ChS-1株在病毒含量及Cap蛋白表达量上均明显优于其他两个毒株。

本发明获得的重组杆状病毒ChS-1株，其ORF2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示，所编码的氨基酸序列为SEQ IDNO.2所示。