[发明专利]表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒及其应用有效
申请号: | 201811565176.6 | 申请日: | 2018-12-20 |
公开(公告)号: | CN109694857B | 公开(公告)日: | 2023-08-18 |
发明(设计)人: | 张智明;柴华;梁宛楠;孙晓峰;李鑫;李建华;杨大伟;刘旭;蒋迪;孙敏娜;赵刚 | 申请(专利权)人: | 哈药集团生物疫苗有限公司 |
主分类号: | C12N7/01 | 分类号: | C12N7/01;C07K14/01;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93 |
代理公司: | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人: | 余光军;霍雪梅 |
地址: | 150069 黑龙*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 表达 圆环 病毒 cap 蛋白 重组 杆状病毒 及其 应用 | ||
1.一株表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组杆状病毒ChS-1株,其特征在于,其微生物保藏编号为:CGMCC No.16820。
2.按照权利要求1所述的重组杆状病毒ChS-1株,其特征在于,其ORF2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示,所编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。
3.权利要求1或2所述的重组杆状病毒ChS-1株在制备预防猪圆环病毒3型的药物或试剂中的应用。
4.一种预防猪圆环病毒3型的疫苗组合物,其特征在于,包括:预防上有效量的灭活的权利要求1或2所述重组杆状病毒ChS-1株以及药学上可接受的佐剂或载体。
5.一种猪圆环病毒3型重组杆状病毒灭活疫苗的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)增殖权利要求1或2所述的重组杆状病毒ChS-1株,表达猪圆环病毒3型Cap蛋白,收获抗原液;(2)将抗原液加入灭活剂进行灭活,灭活后抗原液与佐剂混合,乳化,即得。
6.按照权利要求5所述的制备方法,其特征在于:步骤(1)将权利要求1或2所述的重组杆状病毒ChS-1株接种昆虫细胞进行增殖,收取病变细胞,冻融,离心,取上清液,得到抗原液。
7.按照权利要求6所述的制备方法,其特征在于:所述昆虫细胞为Sf9或Highfive昆虫细胞;
所述接种为按MOI为1.0的接种量进行接种;
所述抗原液中猪圆环病毒3型Cap蛋白的浓度≥10μg/ml。
8.按照权利要求5所述的制备方法,其特征在于:步骤(2)所述灭活剂为二乙烯亚胺溶液;所述灭活剂的终浓度为5.0mM;
所述灭活的条件为:37℃灭活24小时,然后加入终浓度为5.0mM的硫代硫酸钠溶液终止灭活。
9.按照权利要求5所述的制备方法,其特征在于:按体积比计,步骤(2)灭活后抗原液:佐剂=9:1;
其中,所述佐剂为MontanideISA 15A VG佐剂。
10.权利要求5至9任何一项所述的制备方法制备得到的猪圆环病毒3型重组杆状病毒灭活疫苗。
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