[发明专利]一种血管内皮抑制素皮下注射剂

说明书

本发明涉及一种血管内皮抑制素皮下注射剂，所述注射剂包含高浓度的血管内皮抑制素和缓冲体系以及吐温80。当在制剂中使用少量的吐温80时，血管内皮抑制素聚集现象将得到显著地改善中，获得的皮下注射制剂的稳定性较好。

技术领域

本发明属于药物制剂领域，特别涉及一种血管内皮抑制素皮下注射剂及其制备方法。

背景技术

血管内皮抑制素(Endostatin)是胶原X VIII羧基段的一段分子量大小为20kDa的酶切产物，其氨基酸序列为：

(M)HSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFLSSRLQD LYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIFSFDGKDVLRHPTWPQKSV WHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHAYIVLCIENSFMTA SK(SEQ ID No.1)，其中,当由大肠杆菌表达时其N末端的Met有时会被部分删除。

罗永章教授等人通过修饰人血管内皮抑制素的核苷酸编码序列，生产出N末端带有9个附加氨基酸序列的重组人血管内皮抑制素(取名为：中文名：恩度)(ZL 00107569.1)，其氨基酸序列为：

(M)GGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTF RAFLSSRLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIFSFDGKDVLR HPTWPQKSVWHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHAYIV LCIENSFMTASK(SEQ ID No.2)，其中，当由大肠杆菌表达时其N末端的Met有时会被部分删除(其序列为SEQ ID NO.3：

GGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFLSS RLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIFSFDGKDVLRHPTWP QKSVWHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHAYIVLCIENS FMTASK)。重组的人血管内皮抑制素Endostar保持内源性Endostatin的所有生物活性，同时解决了Endostatin在生产过程中复性困难的难题，表达水平更高，疗效更强，并且没有因为附加N端序列而导致体内免疫原性，其注射液已经获得国家药品食品监督管理局的批准上市销售，临床上联合NP化疗方案用于非小细胞肺癌患者。

但是重组的人血管内皮抑制素和其他重组蛋白药物一样，体内半衰期很短。已上市的恩度注射液在14天的给药周期里每天需要滴注给药两小时，患者临床顺应性很差；同时二期临床试验的结果发现，总剂量和滴注次数可影响峰浓度和谷浓度水平，个体间药时曲线差异性很大，这在一定程度上影响了药物的疗效稳定性。

皮下给药可以大大缩短给药时间，并且临床操作上也更为便捷。另外，国际上已经有案例表明，蛋白药物从静脉注射改为皮下注射后，血药峰值浓度降低，可能会减少药物的副作用，另外，药物浓度是缓慢上升和下降，能够较长时间维持在一个较稳态的水平，可能会提高疗效。

由于皮下注射的体积限制，血管内皮抑制素的制剂浓度需要达到50mg/mL甚至更高，但当血管内皮抑制素处于较高浓度比如50mg/mL，甚至60mg/mL或更高时，重组血管内皮抑制素十分容易聚集，这会影响皮下给药制剂的货架期。虽然申请人尝试过使用多种表面活性剂(如吐温20、泊洛沙姆等)均无法获得满意此浓度下的稳定制剂。

然而发明人惊讶地发现，当在制剂中使用少量的吐温80时，且浓度在0.05％～0.1％的范围内，血管内皮抑制素聚集现象将得到显著地改善中，获得的注射制剂稳定性较好。

发明内容