[发明专利]丙型肝炎病毒重组抗原及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，具体而言，涉及一种丙型肝炎病毒重组抗原及其应用。该重组抗原，其序列中包含core、NS3、NS4A、NS4B的蛋白区段。该重组抗原各区优势表位抗原连接，灵敏度高，稳定性好。本发明还改良了包被抗原和与标记物相偶模式，不引入其他蛋白，同时保证抗原活性和试剂盒灵敏度的情况下，优化试剂盒特异性。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体而言，涉及一种丙型肝炎病毒重组抗原及其应用。

背景技术

丙型肝炎病毒(Hepatitis Virus C，HCV)是一类球形的单股正链RNA病毒，长度约为9600个核苷酸。基因组序列具有高度变异性。根据不同区域的基因序列变异情况，丙型肝炎病毒分为6个基因型和80多种基因亚型。目前研究显示，丙型肝炎病毒的ORF可编码至少11个蛋白，包括3个结构蛋白：核心蛋白(core)、E1和E2；7个非结构蛋白：NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B，以及小蛋白P7。

丙型肝炎病毒感染后，约80％的人并不会出现任何症状；急性症状包括发热、全身乏力、食欲下降、恶心、呕吐、腹痛、尿色深、大便颜色变浅、关节酸痛和黄疸；约75-85％的新感染者出现慢性肝病，慢性感染者中60-70％会出现慢性肝病，5-20％会出现肝硬化，1-5％会死于肝硬化或肝癌。

丙型肝炎病毒虽然在感染者体内滴度较低，但其几乎所有结构和非结构蛋白都能够诱发机体的免疫应答，并产生相应的抗体。抗丙型肝炎病毒抗体是人体免疫细胞对丙型肝炎病毒感染做出免疫反应而产生的抗体。抗HCV抗体检测具有简便、快捷、易于开展的特点，是目前公认的HCV感染筛查首选检测方法。

发明内容

本发明提供了一种丙型肝炎病毒重组抗原，并对其可能的应用进行了阐述。该重组抗原各区优势表位抗原连接，灵敏度高，稳定性好。

具体的，本发明涉及一种丙型肝炎病毒重组抗原，其序列中包含core、NS3、NS4A、NS4B的蛋白区段。

本发明提供了一种丙型肝炎病毒重组抗原，并对其可能的应用进行了阐述该重组抗原各区优势表位抗原连接，灵敏度高，稳定性好。

根据本发明的一方面，本发明还涉及如上所述的重组抗原在制备丙型肝炎检测剂中的应用。

根据本发明的一方面，本发明还涉及一种丙型肝炎检测试剂盒，其含有包被丙型肝炎第一抗原Ag₁的固相载体以及标记有标记物的丙型肝炎第二抗原Ag₂；其中Ag₁与Ag₂中的至少一种为如上所述的重组抗原。

具体实施方式

本发明同时提供一种改良的双抗原夹心法丙型肝炎试剂盒制备方法，该方法所用抗原为丙型肝炎病毒抗原各区优势表位抗原连接并重复串联表达而成或者化学技术自相偶联而成的嵌合抗原，灵敏度高，稳定性好；本发明还改良了包被抗原和与标记物相偶模式，不引入其他蛋白，同时保证抗原活性和试剂盒灵敏度的情况下，优化试剂盒特异性。即先将抗原采用基因工程技术同片段重复串联表达或化学交联方法使其按一定比例自身交联，形成重复表位，增加表位暴露几率；表面修饰磁珠和处理碱性磷酸酶，偶联抗原时避开与抗原巯基和氨基连接的反应模式，减少抗原表位覆盖的概率。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

本发明涉及一种丙型肝炎病毒重组抗原，其序列中包含core、NS3、NS4A、NS4B的蛋白区段。

在一些实施方式中，所述core、NS3、NS4A、NS4B的蛋白区段中的一种或多种重复表达≥2次。

在一些实施方式中，所述重组抗原以core-NS3-NS4A-NS4B的顺序串联。

在一些实施方式中，所述重组抗原以(core-NS3-NS4A-NS4B)×2的顺序串联。