[发明专利]细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法

权利要求书

1.细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

细胞培养物经串接的亲和色谱柱和体积排阻色谱柱进行梯度洗脱和检测；

梯度洗脱的流动相包括：流动相A：40-60mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠混合物，250-350mM氯化钠，pH 6.8±0.5；流动相B：50-150mM甘氨酸，100-200mM氯化钠，pH2.5±0.5；

所述串接为直接串接或采用六通阀转动连通的串接；

当所述亲和色谱柱和所述体积排阻色谱柱采用直接串接的方式时，梯度洗脱程序为：0%B 0-60min，100%B 60.1-90min；

当所述亲和色谱柱和所述体积排阻色谱柱采用六通阀转动连通的串接方式时，梯度洗脱程序为：0%B 0-10min，100%B 10.1-15.1min，0%B 15.2-40min；

所述亲和色谱柱的填料的配基类型为Protein A。

2.根据权利要求1所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的流动相包括：流动相A：50mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠混合物，300mM氯化钠，pH 6.8；流动相B：100mM甘氨酸，150mM氯化钠，pH2.5。

3.根据权利要求1所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，所述亲和色谱柱内接于六通阀的进样定量环的流路上。

4.根据权利要求1所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，所述细胞培养物中的目标蛋白质包括IgA、IgG、IgM、Kappa轻链、Lambda轻链、细胞因子中的任一种。

5.根据权利要求4所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，所述细胞培养物中的目标蛋白质为IgG 1。

6.根据权利要求1所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，所述体积排阻色谱柱包括TOSOH TSK G3000_SWXL、Waters Protein BEH2或Agilent AdvanceBio SEC中的任一种。

7.根据权利要求6所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，所述体积排阻色谱柱为TOSOH TSK G3000_SWXL。

8.根据权利要求1所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的流速为0.2-1mL/min。

9.根据权利要求1所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，采用紫外-可见光进行检测。

10.根据权利要求9所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，检测波长为280nm。

11.根据权利要求1所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，将细胞培养物预处理后进行梯度洗脱和检测，预处理的方法包括：取细胞培养物上清液，离心再取上清液作为待测样品。

12.根据权利要求11所述的细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法，其特征在于，所述离心的条件为：转速为10000-16000rpm，时间为5-15min，温度为5±1℃。