[发明专利]一种TOP2A基因的FISH探针的制备方法

权利要求书

1.一种TOP2A基因的FISH探针文库的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括以下步骤：

(1)制备得到探针1；

(2)酶切打断步骤(1)获得的探针1，得到探针2；

(3)给步骤(2)获得的探针2添加接头，得到探针3；

(4)对步骤(3)获得的探针3进行不对称扩增，得到FISH探针文库；

所述的步骤(1)中的探针1为探针1A和探针1B；

所述的探针1A为针对TOP2A的基因的一条探针；

所述的探针1B为针对人类17号染色体着丝粒区域的一条探针；

所述的探针1A为1ng/μL的BAC克隆RP11-885J9；

所述的探针1B为1ng/μL的BAC克隆RP11-25J2；

所述步骤(2)中酶切打断所使用的酶为限制性内切酶混合液，所述的限制性内切酶混合液包括10000U/mLAluI、5000U/mLHpyCH4V、10000U/mLMluCI和10000U/mLBfaI，其体积比为1:2:0.5:0.4；

所述的步骤(3)中添加接头的方法为：通过T4 DNA连接酶将探针2和接头序列连接；

所述的接头序列为A1接头和A2接头，其中A2接头5’端第一个碱基C含有磷酸化修饰：

所述的A1接头的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列：

5’-CCTCTGTATGCGCATCCTGTGAT-3’；

所述的A2接头的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示的序列：

5’-CCATCACATCTCTGAGTGTCTCCGA-3’；

所述的步骤(4)中不对称扩增的体系包括：dNTP、aminoallyl-dUTP、Epimark HotstratTaq DNA polymerase、引物和探针3；

所述的引物为：

正向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO：3所示的序列：

5’-CCTCTGTATGCGCATCCTGTGAT-3’；

负向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO：4所示的序列：

5’-TCGGAGACACTCAGAGATGTGATGG-3’；

所述的dNTP和aminoallyl-dUTP的摩尔比为4:1；

所述的dNTP中的dTTP和aminoallyl-dUTP的摩尔比为1:4；

所述的正向引物和负向引物的浓度分别为1μM和20μM。

2.一种TOP2A基因的FISH探针文库，其特征在于：所述的FISH探针文库采用权利要求1所述的制备方法构建而成。

3.一种用于检测TOP2A基因异常的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包含权利要求2所述的探针文库。