[发明专利]重组单纯疱疹病毒、试剂盒及其用途

说明书

本发明涉及重组单纯疱疹病毒、试剂盒及其用途。本发明涉及体外诊断领域，特别涉及循环前列腺癌细胞的检测。本发明提供了重组单纯疱疹病毒，所述重组单纯疱疹病毒是含有感染细胞蛋白4基因的单纯疱疹病毒基因组中的ICP4基因启动子替换为人端粒酶逆转录酶启动子hTERTp的单纯疱疹病毒，其中在病毒基因组中的除ICP4以外的基因中插入受前列腺特异性膜抗原启动子(PSMAp)控制的产生可检测光的蛋白质基因的表达盒。针对现有的方法对前列腺癌CTC的捕获和分离存在着灵敏度不足，特异性不强的缺陷，本发明提供了一种快速，高灵敏度和特异性的前列腺癌CTC检测方法。

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，特别涉及循环前列腺癌细胞的检测，具体涉及重组单纯疱疹病毒、试剂盒及其用途。

背景技术

前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤。2012年我国肿瘤登记地区前列腺癌发病率为9.92/10万，列男性恶性肿瘤发病率的第6位。发病年龄在55岁前处于较低水平，55岁后逐渐升高，发病率随着年龄的增长而增长，高峰年龄是70～80岁。在欧美发达国家，前列腺癌肿瘤中仅次于肺癌的致男性死亡的第二病因。近年来，随着老龄化的加剧及各种检测手段的更新和广泛应用，我国前列腺癌的发病率明显升高。

目前，前列腺癌的早期筛查主要是PSA筛查。虽然PSA是最常用的检测前列腺癌的手段，但良性前列腺增生和前列腺炎也会出现PSA阳性的结果，筛查的假阳性率高。而前列腺癌最常用的诊断方法是超声引导下经直肠前列腺穿刺，但这一方法存在诸多局限性。多数前列腺癌在超声上不能显示，因此穿刺是随机的“盲穿”，难以实现对病灶的精确定位，诊断灵敏性不够，漏诊风险较高。尤其是对于发生于中央腺体的前列腺癌，漏诊率更高，一些高危患者需经过多次穿刺才能确诊。因此急迫需要新型的筛查，诊断和检测方式提高前列腺癌诊断灵敏性及特异性。

循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells，CTC)是从肿瘤病灶脱离并播散到血液中的肿瘤细胞，这些CTC细胞正是造成恶性肿瘤转移和复发的原因。CTC检测是目前最具巨大发展潜力的无创诊断和实时疗效监测手段,对于前列腺癌患者早期转移、复发的筛查、诊断有重要意义。

目前，依据的原理可将检测CTC的方法分为免疫学方法捕获和物理学方法分离两大类。免疫学方法捕获是利用白细胞特异性表面抗原(如CD45，CD14，CD56等)来去除白细胞的负向筛选或用上皮细胞黏附分子，如EpCAM等抗体进行正向富集。现阶段，大部分设备和方法通过免疫学方法捕获CTC，其中Cellsearch是美国食品和药品管理局目前唯一批准使用的的CTC检测系统。这种检测方法存在大量缺陷，由于该方法只能检测到EpCAM表面抗原阳性的CTC，当肿瘤细胞表面抗原出现缺失或低表达的情况下，则出现假阴性结果。此外，Cellsearch的灵敏度不高，对部分CTC较少的患者，检测的灵敏度不足。物理学方法依据肿瘤细胞大小、通过滤膜直接富集CTC。其不足在于会漏检直径小于滤膜孔径的和存活状态不好或萎缩的CTC，而且CTC富集能力较差，背景较高。目前，也有部分方法将两者结合起来，提高了一定的捕获能力，但是其本质上的不足并没有得到一定的解决。

整体来讲，现有的方法对前列腺癌CTC的捕获和分离存在着灵敏度不足，特异性不强的缺陷，急需一种快速，高灵敏度和特异性的前列腺癌CTC检测方法。

发明内容

本发明为了克服上述方法的缺陷和不足，提供一种检测结果稳定，准确率高，灵敏度高，精密性好，适于临床推广的循环肿瘤细胞，优选前列腺癌循环肿瘤细胞的检测试剂盒以及其用途。通过本发明的检测试剂盒获得的检测结果稳定，可重复性好，准确率高，灵敏度高，精密性好。