[发明专利]利用树鼩骨髓间充干细胞建立HCV细胞模型的方法

权利要求书

1.利用树鼩骨髓间充干细胞建立HCV细胞模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

先采用OCLN慢病毒载体对树鼩骨髓间充干细胞进行感染，然后，加入CD81慢病毒载体继续进行感染，接着，再加入miR-122慢病毒载体进行感染，感染4h之后，再加入体积是当前培养基体积1/2的含2-6μg/mL polybrene的新鲜培养基，第二天，去除旧的培养基，换上新鲜培养基继续培养，得到OCLN/CD81/miR-122-BM-MSCs；之后，将HCVcc病毒接种于OCLN/CD81/miR-122-BM-MSCs中，得到HCV细胞模型；

所述的新鲜培养基为DMEM/F12培养基+10%FBS+100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。

2.根据权利要求1所述的利用树鼩骨髓间充干细胞建立HCV细胞模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

先向树鼩骨髓间充干细胞中加入OCLN慢病毒载体，混匀后放入37℃、5% CO₂孵箱中感染0.5-1h后，再加入CD81慢病毒载体，混匀后放入37℃、5% CO₂孵箱中感染0.5-1h后，最后再加入miR-122慢病毒载体，混匀后放入37℃、5% CO₂孵箱中感染4小时，之后再加入体积是当前培养基体积1/2的含2-6μg/mL polybrene的新鲜培养基，第二天，去除旧的培养基，换上新鲜培养基，继续在37℃、5% CO₂孵箱中培养，得到OCLN/CD81/miR-122-BM-MSCs；最后，将HCVcc病毒接种于OCLN/CD81/miR-122-BM-MSCs中，得到HCV细胞模型。

3.根据权利要求1或2所述的利用树鼩骨髓间充干细胞建立HCV细胞模型的方法，其特征在于，所述的OCLN慢病毒载体为pHBLV-OCLN-CMVIE-mcherry-T2A-Puro。

4.根据权利要求1或2所述的利用树鼩骨髓间充干细胞建立HCV细胞模型的方法，其特征在于，所述的CD81慢病毒载体为pHBLV-CD81-CMVIE-ZsGreen-Puro。

5.根据权利要求1或2所述的利用树鼩骨髓间充干细胞建立HCV细胞模型的方法，其特征在于，所述的miR-122慢病毒载体为pHBLV-miR-122-U6-Scramble-Puro。

6.根据权利要求1或2所述的利用树鼩骨髓间充干细胞建立HCV细胞模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

复苏树鼩骨髓间充质干细胞，按5×10⁵个/mL接种含新鲜培养基的6孔板中，每孔2mL，待次日细胞生长至汇合度为50-70%时，吸去原有培养基，加入体积是原有培养基体积1/2的含2-6μg/mL polybrene的新鲜培养基，按感染复数MOI=15-30，将7.5-15μL OCLN慢病毒载体加入到树鼩骨髓间充质干细胞中，混匀后37℃、5% CO₂孵箱中感染0.5-1h；

之后，取出该细胞再加入15-30μL CD81慢病毒载体，混匀后放入37℃、5% CO₂孵箱中感染0.5-1h；

最后再加入7.5-15μL miR-122慢病毒载体，混匀后放入37℃、5% CO₂孵箱中感染4小时；

感染结束后，之后加入体积是当前培养基体积1/2的含2-6μg/mL polybrene的新鲜培养基，第二天，去除旧的培养基，换上新鲜培养基，继续在37℃、5% CO₂孵箱中培养，得到OCLN/CD81/miR-122-BM-MSCs；

最后，将HCVcc病毒接种于OCLN/CD81/miR-122-BM-MSCs中，得到HCV细胞模型。