[发明专利]一种维持金针菇菌种活力的方法

说明书

本发明提供一种维持金针菇菌种活力的方法，采取的技术方案包括金针菇异核体菌种原生质体单核化，获得其单核化菌株，分别进行常规保藏，使用时金针菇异核体菌种与其单核化菌株进行配对，获得其重生的异核体菌种，这样即可对金针菇菌种的活力进行有效维持。本方法在获得单核化菌株的基础上，只需要将原来的品种与其单核化的菌株进行重新配对，获得新生的品种。通过这种方式获得的新生品种，在遗传物质上没有发生改变，保持了原来品种的特性，且菌种活力很高。在操作上简单易行，便可对菌种的活力进行有效地维持。

技术领域

本发明属于金针菇领域，更涉及一种金针菇菌种活力维持的方法。

背景技术

金针菇属于四极性异宗结合的菌类，原拉丁名为Flammulina velutipes，2018年杨祝良研究团队与国内外同行合作发现，从东亚“冬菇”驯化而来的“金针菇”与原初描述于欧洲的毛腿金针菇是两个不同的物种，为此该团队给“冬菇”或“金针菇”起了一个学名，即“F. filiformis”。

金针菇是我们熟悉的一种食用菌，不但味美可口，而且具有抗氧化、提高免疫力等多种功效。它是我国最早实现工厂化栽培的菌类，近年来，随着工厂化技术的日益成熟，其产量不断地提高，2015年产量达261万吨，按产量在我国食用菌中排第4位。然而，金针菇产量的提高，很大程度得益于瓶栽技术的引进，而我国金针菇瓶栽工厂化使用的菌种几乎是从日本引进，且需要定期从日本引进更换菌种，即从日本那引进的金针菇菌种使用一段时间后，容易出现退化，需要重新引进活力好的菌种以保证稳定的生产。

菌种是生产的基础，活力高的菌种是进行稳定生产的前提，因此维持菌种原有的活力显得极其重要。目前，维护食用菌菌种活力的方式主要进行提纯复壮，有组织分离选择法、适当更换培养基、菌丝尖端分离以及其它的方法，如脱毒。这些方法虽能在一定程度上提高菌种的活力，但实际应用中往往不能保证提纯复壮后的菌种与原来的菌种活力一致。如组织分离，若该菌种已出现退化了，则分离的菌种是退化的菌种。因此找到一种方法能维持菌种的活力显得非常重要。

发明内容

鉴于上述背景，本发明提供了一种维持金针菇菌种活力的方法。

本发明采取的技术方案包括金针菇异核体菌种的原生质体单核化，获得其单核化菌株，分别进行常规保藏，使用时金针菇异核体菌种与其单核化菌株进行配对，获得其重生的异核体菌种，这样即可对金针菇菌种的活力进行有效维持。

金针菇品种‘F’泛指所有的金针菇品种。本方法适合于所有的金针菇菌种活力维持。

本发明的金针菇菌种活力维持的方法包括以下步骤：

（1）将金针菇品种‘F’的单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’从保藏管取出，接种于马铃薯葡萄糖固体培养基中，即PDA培养基，正面放置于22～25℃恒温生化培养箱，培养6～10d；

（2）将金针菇品种‘F’从保藏管取出，接种于PDA培养基，正面放置于22～25℃恒温生化培养箱，培养5～7d；

（3）在无菌操作环境下，取金针菇品种‘F’新鲜菌块，放于直径9 cm的 PDA培养基平皿中间位置，，同时接入金针菇品种的单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’的菌块，两者相距1～1.5 cm，即配对，正面放置于22～25℃恒温生化培养箱，待两菌丝接触后，继续培养3～5d；

（4）两菌丝充分接触后，在无菌操作环境下，从单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’的一侧边缘取菌块，标记为‘F-1’，于新的PDA培养基，正面放置于22～25℃恒温生化培养箱，培养3～5d；

（5）取‘F-1’前端的菌块于载玻片上、盖上盖玻片、压片，在显微镜下观察其菌丝是否有锁状联合，若能观察到即可，若不能观察到，则增加（3）中的培养时间，重复（4）、（5）步骤，直到可以看到锁状联合。菌丝有锁状联合的‘F-1’即为恢复新活力的‘F’品种。