[发明专利]一种维持金针菇菌种活力的方法

权利要求书

1.一种维持金针菇菌种活力的方法，其特征在于：方法包括以下步骤：

（1）将金针菇品种‘F’的单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’从保藏管取出，接种于马铃薯葡萄糖固体培养基即PDA培养基中，正面放置于22～25℃恒温生化培养箱，培养6～10d；

（2）将金针菇品种‘F’从保藏管取出，接种于PDA培养基，正面放置于22～25℃恒温生化培养箱，培养5～7d；

（3）在无菌操作环境下，取金针菇品种‘F’新鲜菌块，放于直径9 cm的 PDA培养基平皿中间位置，同时接入金针菇品种‘F’的单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’的菌块，两者相距1～1.5cm，即配对，正面放置于22～25℃恒温生化培养箱，待两菌丝接触后，继续培养3～5d；

（4）两菌丝充分接触后，在无菌操作环境下，从单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’的一侧边缘取菌块，标记为‘F-1’，于新的PDA培养基，正面放置，于22～25℃恒温生化培养箱，培养3～5d；

（5）取‘F-1’前端的菌块于载玻片上、盖上盖玻片、压片，在显微镜下观察其菌丝是否有锁状联合，若能观察到即可，若不能观察到，则增加步骤（3）中的培养时间，重复（4）、（5）步骤，直到看到锁状联合；菌丝有锁状联合的‘F-1’即为恢复活力的‘F’品种；

所述金针菇品种‘F’的单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’，是指将异核体的金针菇品种‘F’，经过原生质体单核化，获得单核化的菌株‘FD1’或‘ FD2’。

2.根据权利要求1所述的一种维持金针菇菌种活力的方法，其特征在于：金针菇品种‘F’单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’ 的制备方法：

（1）将活化后的金针菇品种‘F’接种于马铃薯葡萄糖液体培养基，静置培养3～5 d；

（2）取新鲜菌丝于无菌的1.5mL离心管，用灭菌过的0.5 mol/L的KCl清洗2遍；

（3）加入1mL含2wt.%溶壁酶的0.5 mol/L的KCl，恒温30℃水浴酶解1.3～1.8 h；

（4）将酶解好的菌丝液用带棉塞的注射器过滤到1.5ml 离心管，5000rpm/min离心10min，弃上清保留沉淀；

（5）吸取0.6mol/L甘露醇1 mL悬浮沉淀，5000rpm/min离心10 min，弃上清保留沉淀；

（6）用0.6～1 mL的0.6mol/L甘露醇溶解沉淀，吸50 uL镜检，根据原生质体量稀释至一个视野下2～3个原生质体，然后取150～180 u L涂布于再生培养基，25℃培养，2~3 d观察原生质体萌发情况；

（7）原生质体萌发后在显微镜下将其挑起，于新的PDA培养基，菌落长至2～3 cm后，镜检，选择其菌丝未看到锁状联合的菌株，即为金针菇品种‘F’的单核化菌株‘FD1’或‘ FD2’。

3.根据权利要求1所述的一种维持金针菇菌种活力的方法，其特征在于：金针菇品种‘F’为农金7号。