[发明专利]乳酸菌抗菌肽及高效表达及抗菌抗癌活性的应用

权利要求书

1.一种乳酸菌抗菌肽，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述的乳酸菌抗菌肽的表达方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1. 合成序列为SEQ ID NO.1的抗菌肽基因序列；

S2. 构建含S1合成出来的抗菌肽基因序列的重组大肠杆菌工程菌；

S3. 抗菌肽融合蛋白的诱导表达；

S4. 抗菌肽的纯化。

3.根据权利要求2所述的乳酸菌抗菌肽的表达方法，其特征在于：所述S1过程包括 ：根据干酪乳杆菌基因GenBank：MOAG00000000.1并应用生物信息学工具计算各组合的一级特征参数、预测二级和抗菌活性，设计出具有医疗潜力的抗菌肽序列SEQ ID NO.1；根据大肠杆菌对密码子的偏爱性将抗菌肽的基因序列翻译成核酸序列，在其两端加上Bsa I和HindIII限制性内切酶位点和保护性碱基，合成引物F1、R1，所述引物的核苷酸序列为SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3。

4.根据权利要求2所述的乳酸菌抗菌肽的表达方法，其特征在于：所述 S2 过程包括：构建抗菌肽表达质粒pE-SUMO-LHH1 并测序鉴定，构建基因工程菌株pE-SUMO-EA-LHH1/Rosetta（DE3）pLysS并测序鉴定，测序鉴定的结果为：SEQ ID NO. 4，测序结果使用NCBIBlast与所设计的基因进行对比，选取两者结果一致的重组菌为测序结果正确的重组菌。

5.根据权利要求2所述的乳酸菌抗菌肽的表达方法，其特征在于：所述S3过程中包括：将步骤S2中测序结果正确的重组菌和含有空载体的对照菌进行平板培养、种子培养，将发酵液中菌体生长到对数期后分别加入 IPTG 诱导表达，然后进行SDS-PAGE 分析和HPLC 分析，选取表达成功的抗菌肽。

6.根据权利要求4所述的乳酸菌抗菌肽的表达方法，其特征在于：所述S4过程包括：将基因工程菌pE-SUMO-EA-LHH1/Rosetta（DE3）pLysS大量培养、诱导，收集菌体并获得融合蛋白，进行亲和层析纯化，纯化后的融合蛋白经肠激酶切割去除标签，然后进行定量，纯化样品保留。

7.权利要求1所述的乳酸菌抗菌肽制备抗菌制剂的应用，所述抗菌作用菌株为金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。