[发明专利]一种提高松二糖产量的淀粉蔗糖酶突变体有效
| 申请号： | 201811547298.2 | 申请日： | 2018-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN109468298B | 公开（公告）日： | 2022-03-15 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;吴丹;宿玲恰;赵雅琪 | 申请（专利权）人： | 江南大学（如皋）食品生物技术研究所;江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/70;C12P19/12 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 226599 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 松二糖 产量 淀粉 蔗糖 突变体 | ||
1.一种淀粉蔗糖酶突变体，其特征在于，所述突变体是通过将出发氨基酸序列为SEQID NO.1的淀粉蔗糖酶第447位氨基酸由天冬氨酸突变为缬氨酸得到的，命名为D447V。
2.一种制备权利要求1所述淀粉蔗糖酶突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)根据确定的突变位点，设计定点突变的突变引物，以携带淀粉蔗糖酶基因的载体为模板进行定点突变；构建含编码突变体的基因的质粒载体；
(2)将突变体质粒转化进宿主细胞；
(3)挑选阳性克隆进行发酵培养，收集菌体破壁后的上清液即为淀粉蔗糖酶突变体的粗酶液。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述质粒载体为pUC系列，pET系列，或pGEX中的任意一种.
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为细菌或真菌细胞；所述的细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。
5.一种生产松二糖的方法，其特征在于，所述方法是以蔗糖为底物，以权利要求1所述的一种淀粉蔗糖酶突变体为催化剂，将蔗糖转化为松二糖。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述蔗糖的浓度为180～220g/L，所述淀粉蔗糖酶突变体的浓度为0.2～0.5U/mL。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述转化是在30～40℃条件下进行45～50h。
8.权利要求1所述的一种淀粉蔗糖酶突变体在制备含松二糖的产品方面的应用。
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