[发明专利]一种以果渣、酒糟为原料的生物饲料混菌发酵方法

权利要求书

1.一种以果渣、酒糟为原料的生物饲料混菌发酵方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）种子液的制备

双孢菇：用接种铲从已活化的双孢菇斜面菌种上铲取3-4块0.5cm²的菌块接种至装有种子液培养基的锥形瓶中，装液量为100mL/250mL，在26℃恒温摇床上振荡培养3-4d，摇床转速140r/min，制得双孢菇种子液；

里氏木霉：将里氏木霉菌种接种到PDA培养基斜面上，在28℃恒温培养箱中培养，长出孢子后用无菌生理盐水将孢子洗下，制成浓度为1×10⁷个/ml的孢子悬液，按5%接种量接种到装有PDB培养基的锥形瓶中，装液量为70mL/250mL，在28℃恒温摇床上振荡培养36-48h，摇床转速120r/min，制得里氏木霉种子液；

酿酒酵母：将酿酒酵母菌种接种到麦芽汁琼脂培养基斜面上，在28℃恒温培养箱中培养72h，再接种到麦芽汁液体培养基中，装液量为100mL/250mL，在28℃恒温摇床上振荡培养48-72h，摇床转速160r/min，制得酿酒酵母种子液；

（2）混菌发酵液的制备

按照5%的接种量将双孢菇种子液接种到装有液体培养基的发酵罐中，通入净化空气后开始发酵培养，发酵罐装液量为55-65%，液体培养基起始pH调节为6.5左右，培养2d后，按照3%和2%的接种量将米曲霉和酿酒酵母种子液一起接入，继续培养3-4d，制得混菌发酵液；

（3）混菌发酵液的刺激处理

接种前将混菌发酵液盛于锥形瓶中进行刺激处理，先采用超声波生物刺激生长仪处理40min，再采用特定电磁波治疗仪处理20min；

（4）生物饲料的制备

按照15%的接种量将处理后的混菌发酵液接种到以果渣、酒糟为原料的固体培养基上，固体培养基无需灭菌，初始pH调节为6.5左右，料水比调节为1:1左右，搅拌均匀后在温度27-29℃的条件下发酵6-7d，发酵期间注意保持室内通风，发酵结束后将固体产物在45℃下烘干、粉碎，制得生物饲料。

2.根据权利要求1所述的一种以果渣、酒糟为原料的生物饲料混菌发酵方法，其特征在于，所述步骤（1）中，双孢菇菌种的活化方法为：将双孢菇菌种接种于PDA斜面培养基上， 在26℃恒温培养5-7d，并挑选出菌丝洁白、粗壮、无污染的斜面。

3.根据权利要求1所述的一种以果渣、酒糟为原料的生物饲料混菌发酵方法，其特征在于，所述步骤（1）中，种子液培养基的配方为：麸皮粉4-6g/L，黄豆粉4-6g/L，蔗糖27-33g/L，豆芽汁12-16ml/L，磷酸二氢钾 1.8-2.2g/L，硫酸镁0.9-1.1g/L，氯化钙0.3-0.5g/L，氯化钴 0.2-0.4mg/L，钼酸钠0.3-0.5mg/L，pH值自然。

4.根据权利要求1所述的一种以果渣、酒糟为原料的生物饲料混菌发酵方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所用的培养基都经过121℃灭菌20min。

5.根据权利要求1所述的一种以果渣、酒糟为原料的生物饲料混菌发酵方法，其特征在于，所述步骤（2）中，液体培养基的配方为：蔗糖13-17g/L，苹果渣15-20g/L，橙子渣10-15g/L，蛋白胨3.6-4.0g/L，白酒糟7.3-8.3g/L，麸皮粉5.0-5.4g/L，桔梗水提液8-10ml/L，磷酸二氢钾 2.8-3.2g/L，硫酸镁1.4-1.6g/L，氯化钙0.4-0.8g/L，氯化钴 0.2-0.4mg/L，硫酸锰1.5-1.8mg/L，生物素0.9-1.3mg/L，复硝酚钠5.3-5.9mg/L，吐温-80 10-14ml/L，余量为水。

6.根据权利要求1所述的一种以果渣、酒糟为原料的生物饲料混菌发酵方法，其特征在于，所述步骤（2）中，发酵培养的参数设置为温度27-29℃，搅拌转速155-165r/min，通气量1.0-1.2V/V/M。