[发明专利]一种脱细胞软骨基质及其制备方法在审
| 申请号： | 201811544160.7 | 申请日： | 2018-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN109621010A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 赵子建;王建英;李芳红;潘璐琪;冯文金;史啟 | 申请（专利权）人： | 浙江华臻医疗器械有限公司 |
| 主分类号： | A61L27/36 | 分类号： | A61L27/36;A61L27/50 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市高新技术产业开发区创业*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 软骨基质 制备 脱细胞 机械性能 软骨细胞基质 胰蛋白酶处理 产业化生产 外加交联剂 关节软骨 化学交联 免疫原性 软骨组织 三维结构 核酸酶 去污剂 低渗 保留 | ||
1.一种脱细胞软骨基质的制备方法，其特征在于，将软骨组织依次通过低渗处理、胰蛋白酶处理、去污剂处理和核酸酶处理，制得软骨基质。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在低渗处理中，将软骨组织加入低渗溶液中孵育，室温下孵育15-30h；
优选地，所述低渗溶液为10mM且pH为7-8的Tris-Hcl溶液。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，在胰蛋白酶处理中，将软骨组织加入胰蛋白酶溶液中，在37℃下水浴加热6-24h；
优选地，所述胰蛋白酶溶液为含0.10-0.50％(m/v)胰蛋白酶的PBS溶液。
4.根据权利要求1-3中任一所述的制备方法，其特征在于，在去污剂处理中，将软骨组织加入去污剂溶液中，在温度为15-25℃下振荡处理15-30h；
优选地，所述去污剂溶液为含0.05-0.3％SDS的8-10mM的Tris-Hcl溶液。
5.根据权利要求1-4中任一所述的制备方法，其特征在于，在核酸酶处理中，将软骨组织加入缓冲细胞液中，然后加入30-60U/ml的DNA酶和0.5-4U/ml的RNA酶，在35-40℃下水浴加热6-20h；
优选地，所述缓冲细胞液为含5-30mM氯化镁的Tris-Hcl溶液，所述Tris-Hcl溶液的浓度为30-60mM，pH为7-8。
6.根据权利要求1-5中任一所述的制备方法，其特征在于，在低渗处理之前还包括对软骨组织进行反复冻融处理；
优选地，在反复冻融处理中，将软骨组织置于-70～-80℃下冷冻2-4h，然后置于15-25℃下解冻1-6h，反复冻融1-6次。
7.根据权利要求1-6中任一所述的制备方法，其特征在于，在核酸酶处理之前还包括中性蛋白酶处理；
优选地，在中性蛋白酶处理中，将软骨组织加入含300-700U/L的中性蛋白酶的生理盐水中，在30-40℃下水浴加热4-12h；
优选地，在中性蛋白酶处理之后还包括α-1,3-半乳糖苷酶溶液处理，在α-1,3-半乳糖苷酶处理中，将软骨组织加入含10-40μg/mL的α-1,3-半乳糖苷酶的PBS溶液中，在25-37℃下，浸泡1-6小时。
8.根据权利要求1-7中任一所述的制备方法，其特征在于，在核酸酶处理之后还包括灭菌处理；
优选地，在灭菌处理中，将软骨组织加入消毒液中浸泡1-6h，所述消毒液为含有0.05-0.4vt％乙酸和0.05-0.4wt％次氯酸钠的PBS溶液，或
含有0.05-0.4vt％乙酸和0.05-0.4vt％84消毒液的PBS溶液。
9.根据权利要求1-8所述的制备方法，其特征在于，软骨组织在低渗处理之前还包括前清洗处理；在低渗处理、胰蛋白酶处理、去污剂处理和核酸酶处理之后还包括中间清洗处理；在核酸酶处理之后还包括后清洗处理；
优选地，在前清洗处理中，将软骨组织加入生理盐水中浸泡，然后加入超纯水中超声清洗，再用超纯水持续冲洗；
优选地，在中间清洗处理中，将软骨组织加入超纯水中超声清洗，再用超纯水持续冲洗；
优选地，在后清洗处理中，将软骨组织加入无菌PBS中浸泡。
10.一种权利要求1-9中任一所述的制备方法制得的脱细胞软骨基质。
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