[发明专利]基于人工串联启动子的枯草芽孢杆菌高效诱导表达系统有效
| 申请号： | 201811542046.0 | 申请日： | 2018-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN109486847B | 公开（公告）日： | 2021-03-02 |
| 发明（设计）人： | 周哲敏;崔文璟;郝文亮;韩来闯;周丽;刘中美;燕宇 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 人工 串联 启动子 枯草 芽孢 杆菌 高效 诱导 表达 系统 | ||
1.一种调控基因表达的元件，其由如下方法构建得到：
（1）将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的人工串联启动子PAWH-D30-106与目的蛋白基因表达框克隆至pHT01载体上，替换原载体上的Pspac启动子序列；
（2）阻遏蛋白为LacI，位于启动子转录起始位点下游的与阻遏蛋白结合的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，将阻遏蛋白LacI的结合片段设计在引物GGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCATGCTTTTATTCGAACATCATATTTAAAG/GGAATTGTTATCCGCTCACAATTCCTAGTGTATCAATTCCACGATTTTTTC上，利用全质粒PCR方法将核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的LacI蛋白结合位点克隆至启动子PAWH-D30-106转录起始位点的下游；
或（2）阻遏蛋白为XylR，位于启动子转录起始位点下游的与阻遏蛋白结合的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，利用引物AGTTAGTTTATTGGATAAACAAACTAACTATGCTTTTATTCGAACATCATATTTAAAG/AGTTAGTTTGTTTATCCAATAAACTAACTTAGTGTATCAATTCCACGATTTTTTC将核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的阻遏蛋白XylR结合位点克隆至启动子PAWH-D30-106转录起始位点的下游，同时将pHT01载体骨架上的
2.包含权利要求1所述元件的基因工程菌。
3.一种调控目的基因表达的方法，其特征在于，将权利要求1所述的元件导入宿主中，在含有诱导剂的环境下培养，通过诱导剂调控目的基因表达。
4.权利要求1所述的元件在制备目的蛋白中的应用，其特征在于，将所述元件导入宿主细胞中，进行培养，并使用诱导剂进行诱导表达。
5.权利要求1所述的元件在食品、化工或制药领域的应用，其特征在于，所述应用为将所述元件导入宿主细胞中，进行培养，并使用诱导剂进行诱导表达。
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