[发明专利]一种通过种子无菌萌发获得沿阶草实生苗的方法

说明书

本发明公开一种通过种子无菌萌发获得沿阶草实生苗的方法，包括如下步骤：1）种子采集的时间及采后的低温预处理；2）种子的消毒灭菌；3）种子外植体的无菌萌发培养；4）壮苗生根培养；5）无菌苗的移栽与成活。该方法不但解决了沿阶草通过种子繁殖种苗困难的难题，而且还具有不受种子果皮或成熟度限制种子萌发，生长期由于水温条件的限制生长缓慢等优点；在短短3个月内就可获得具有完整根茎叶的正常健壮植株，移栽成活率极高可达100%；特别是明显提高了良种繁育质量，克服了生产上无性分株繁殖引起种质严重地衰退现象等问题，也有利于大规模工厂化生产良种，为生产上源源不断地提供整齐健壮的优良种苗及带动优良种苗的示范推广应用。

技术领域

本发明涉及植物育种领域，具体涉及一种通过种子无菌萌发获得沿阶草实生苗的方法。

背景技术

沿阶草(Ophiopogon japonicus)又名麦冬，属百合科沿阶草属多年生常绿草本植物，因其植株低矮，四季常绿，适应性广，喜温耐寒、耐瘠耐阴，抗病虫性好，无需修剪等特性而成为暖季型园林绿化中不可或缺的构景草坪地被植物。沿阶草的块根，又常为滋阴中药，《神农本草经》列为上品，具有养阴生津,润肺清心的功效，还是“药食同源”品种，在保健食品的开发方面也有大量的应用。

沿阶草种子在室外自然条件下发芽极度困难，本室研究发现原因有2点：1是果皮对种子萌发起到抑制作用。沿阶草的种子为肉质果，外果皮为一层蓝紫色蜡质结构，中果皮为较厚的果肉状，内果皮与中果皮紧密相连，是一层和外果皮颜色相似的薄薄的蓝色膜质层。在这三层果皮内部才是坚硬而又具有一定弹性的种子。种子在青绿未成熟时期，果皮和种子很难分离，种子也较硬并具有一定的弹性，此时果皮对种子萌发具有抑制作用，若不剥去果皮，种子萌发率基本为零。2是种子具有后熟性。沿阶草种子的成熟期一般为冬春季节，此时种子经过冬季的低温环境及春季果皮的自然风干，部分种子从果皮中脱落出来，当种子饱满发育正常未受到病虫害的侵染时，大概到了3、4月份会萌发长出芽苗(未发表)。以上原因造成沿阶草通过种子繁殖很困难。生产上沿阶草往往采用分株繁殖，但较低的繁殖系数及缓慢地生长习性，及无性繁殖引起种质严重地衰退现象，极大地影响了沿阶草优良种质的快繁及推广应用。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供了一种通过种子无菌萌发获得沿阶草实生苗的方法。该方法具有操作简单，种子萌发率高，种苗生长健壮，良种选育质量明显提高，并有利于大规模工厂化生产优良种质等优点。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种通过种子无菌萌发获得沿阶草实生苗的方法，包括如下步骤：

1)种子采集的时间及采后的低温预处理：采集的沿阶草种子种类包括有金边细叶型、矮生型、长叶型及银纹沿阶草，采集的时间从当年10月底开始到第二年2月底结束；采集后的种子放入0℃冰箱低温冷藏处理1-2个月；

2)种子的消毒灭菌：把步骤1)采集的种子去果皮，放在洗衣粉中浸泡15-20min后流水冲洗2h，再用2％次氯酸钠液消毒20-25min，灭菌水冲洗3次后吸干表面水分，拿到超净工作台上备用；在超净工作台上用消毒液消毒灭菌，无菌水冲洗8-10次后，用灭菌吸水纸擦干水分，准备接种；

3)种子外植体的无菌萌发培养：将灭菌的种子先接种在琼脂7％+GA4.0mg/L培养基上，7-10天转接在含激素的MS培养基上，在无菌自然光下培养28-30天，统计种子的萌发率、丛生芽增殖倍数及生长发育情况；

4)壮苗生根培养：将上述丛生芽苗或生根芽苗分成单株，剪去老根老叶转入壮苗生根培养基，在1500-2000LX光下培养12h/d，26-30天小芽苗100％长成具有完整根茎叶的正常健壮植株；

5)无菌苗的移栽与成活：将上述生根的组培实生苗揭开瓶口的封口膜室内炼苗1-2d，之后取出小苗，洗净根上附着的培养基，移栽到装有蛭石和泥炭土的混合基质的穴盘中，适当遮荫，并及时浇水，保持种苗处在湿润状态直到长出新根，20d后统计成活率。