[发明专利]一种通过种子无菌萌发获得沿阶草实生苗的方法

权利要求书

1.一种通过种子无菌萌发获得沿阶草实生苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）种子采集的时间及采后的低温预处理：采集的沿阶草（Ophiopogon japonicus）种子种类包括有金边细叶型、矮生型、长叶型及银纹沿阶草，采集的时间从当年10月底开始到第二年2月底结束；采集后的种子放入0℃冰箱低温冷藏处理1-2个月；

2）种子的消毒灭菌：把步骤1）采集的种子去果皮，放在洗衣粉中浸泡15-20min后流水冲洗2h，再用2%次氯酸钠液消毒20-25min，灭菌水冲洗3次后吸干表面水分，拿到超净工作台上备用；在超净工作台上用消毒液消毒灭菌，无菌水冲洗8-10次后，用灭菌吸水纸擦干水分，准备接种；

3）种子外植体的无菌萌发培养：将灭菌的种子先接种在琼脂7%+GA4.0mg/L培养基上，7-10天转接在含激素的MS培养基上，在无菌自然光下培养28-30天，统计种子的萌发率、丛生芽增殖倍数及生长发育情况；

4）壮苗生根培养：将上述丛生芽苗分成单株，剪去老根老叶转入壮苗生根培养基，在1500-2000LX光下培养12h/d，26-30天小芽苗100%长成具有完整根茎叶的正常健壮植株；

5）无菌苗的移栽与成活：将上述生根的组培实生苗揭开瓶口的封口膜室内炼苗1-2d，之后取出小苗，洗净根上附着的培养基，移栽到装有蛭石和泥炭土的混合基质的穴盘中，适当遮荫，并及时浇水，保持种苗处在湿润状态直到长出新根，20d后统计成活率；

所有的培养温度均在25-30℃，步骤2）中的消毒液采用升汞+吐温，消毒灭菌8-10min，步骤3）中的含激素的MS培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT1mg/L。