[发明专利]长期携带乙型肝炎病毒的实验动物模型构建方法

权利要求书

1.一种长期携带乙型肝炎病毒的实验动物模型构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)提取乙型肝炎患者血清病毒DNA，使用引物对HBVF/HBVR进行PCR扩增，引物序列为：

HBVF：

5’-CCGGAAAGCTTATGCTCTTCTTTTTCACCTCTGCCTARTCATC-3’，

HBVR：

5’-CCGGAGAGCTCATGCTCTTCAAAAAGTTGCATGGTGCTGGT-3’；

2)将获得的PCR产物克隆到pEASY-HBV载体中，挑选阳性克隆；

3)提取步骤2)中阳性克隆的质粒，将提取到的质粒用BspQI内切酶酶切，回收酶切片段并纯化，用T4连接酶将其环化并纯化，得到HBV cccDNA；

4)将步骤3)得到的HBV cccDNA注射入小鼠中，即构建了乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型。

2.如权利要求1所述的长期携带乙型肝炎病毒的实验动物模型构建方法，其特征在于：步骤4)中采用水动力法将HBV cccDNA注射入小鼠中。

3.如权利要求2所述的长期携带乙型肝炎病毒的实验动物模型构建方法，其特征在于：每只小鼠的HBV cccDNA注射量为2μg/2mL/只。

4.如权利要求1所述的长期携带乙型肝炎病毒的实验动物模型构建方法，其特征在于：步骤1)中的PCR扩增体系是：5×GC Buffer 10μL，2.5mM dNTPs 4μL，5μM前引物HBVF 1μL，5μM后引物HBVF 1μL，Pusion酶0.5μL，血清DNA模版2μL，水补足50μL；PCR扩增条件是：(1)98℃，30s；(2)98℃，10s，65℃，20s，72℃，1min 45s；此步骤循环25次；(3)72℃，10min。