[发明专利]一种干扰片段及其应用

说明书

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种用于干扰AQP1基因的转录水平的干扰片段及其应用。干扰片段的序列如下：AQP1 RNAi‑FP：5’‑GCUGUACUCAUCUACGACUTT‑3’；AQP1 RNAi‑RP：5’‑AGUCGUAGAUGAGUACAGCTT‑3’。用于干扰AQP1基因的转录水平，可作为制备减缓卵巢过度刺激综合征对应症状的药物、试剂盒的应用。本发明中本申请人通过设计的干扰片段可以对AQP1基因的转录水平起到显著的抑制作用，使得AQP1基因的表达显著下降，从而达到减缓卵巢过度刺激综合征(OHSS)对应症状的目的，具有重要的市场价值和意义。

【技术领域】

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种干扰片段及其应用。

【背景技术】

卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS)是一种用外源性促性腺激素促排卵引起的医源性的自限性疾病，在接受控制性超排卵的病人中，OHSS总的发生率为14％以内，重度约为0.5-2％。随着辅助生育技术的广泛开展，超促排卵药物使用的增加，OHSS的发病有增多的趋势。OHSS能引起体内大量富含蛋白的血浆急性外渗引起腹水、胸水甚至弥漫性水肿，可出现血液浓缩、低血容量，继发肾衰，伴水电解质紊乱、氮质血症以及低血容量休克，甚至血栓形成。临床表现为胃肠道不适、腹水、胸水、少尿、卵巢增大等，严重可危及生命。临床普遍认为OHSS发生与过多卵泡被刺激起来并应用绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)诱发排卵有关，其发生过程设计多种因素参与，目前仍无一种理论能够解释OHSS的所有问题，而且尚无彻底的预防和有效的治本治疗方法。

【发明内容】

针对上述实际存在的问题，我院所项目研究组研究发现在激素作用下，卵巢大量分泌和产生卵泡发育和黄体形成所必需的调节新生血管的血管活性物质，这些血管活性物质作用于卵巢和全身毛细血管的水通道蛋白(AQPs)，导致通透性增加。设计实验中，通过前期的体外HUVEC细胞模型的影响研究发现，添加不同浓度的雌激素E2时，AQP1的表达量随着E2添加量的增加而上升，估测AQP1表达量的提高，细胞膜通透性增加将会促进OHSS的病程发展，因此，课题组提出在通过RNAi干扰AQP1表达，将有利于减缓OHSS对应症状。经过无数试验研究发现了一干扰片段能明显的达到上述的目的。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种干扰片段，用于干扰AQP1基因的转录水平，所述干扰片段的序列如下：

AQP1RNAi-FP：5’-GCUGUACUCAUCUACGACUTT-3’；

AQP1RNAi-RP：5’-AGUCGUAGAUGAGUACAGCTT-3’。

进一步的，如权利要求1所述的干扰片段作为制备干扰AQP1基因的转录水平的药物的应用。

进一步的，权利要求1所述的干扰片段作为制备减缓卵巢过度刺激综合征对应症状的药物、试剂盒的应用。

另一方面，本申请还提供了一种应用权利要求1所述的干扰片段对AQP1基因进行RNA干扰的实验方法，具体包括以下步骤：

(1)、设计好AQP1 siRNA序列，并设计对应的阴性对照siRNA；其中，

AQP1RNAi-FP：5’-GCUGUACUCAUCUACGACUTT-3’，

AQP1RNAi-RP：5’-AGUCGUAGAUGAGUACAGCTT-3’；

(2)、将AQP1 siRNA序列和阴性对照的RNAi干扰序列分装成1OD/管，使用前在3000-4000rpm，离心处理3min；然后加入125μL DEPC H₂O重悬，制备终浓度为20μM的储存液；