[发明专利]一种高效应用于人NK细胞非滋养层体外培养的方法有效
| 申请号： | 201811506232.9 | 申请日： | 2018-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN109762785B | 公开（公告）日： | 2022-06-24 |
| 发明（设计）人： | 李德彬;周哲;路娜;王静 | 申请（专利权）人： | 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京中仟知识产权代理事务所(普通合伙) 11825 | 代理人： | 张田 |
| 地址： | 215200 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 应用于 nk 细胞 滋养 体外 培养 方法 | ||
1.一种高效应用于人NK细胞非滋养层体外培养的方法，其特征在于，所述方法将NK细胞培养分成三个阶段，所述三个阶段为激活阶段、扩增阶段和维持培养阶段：
(1) 激活阶段
取人的血液，分离PBMC，细胞计数后调整细胞密度，将细胞加入到预先用4-1BBL、NovoNectin和MICA-Ig重组蛋白包板的孔板中；
其中4-1BBL工作浓度1~10ug/ml，NovoNectin工作浓度5~50ug/ml，MICA-Ig重组蛋白工作浓度2~20ug/ml，MICA-Ig重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示；
(2)扩增阶段
加入培养因子IL-18、IL15RAIL15融合蛋白、anti-HER2和Anti-CD16培养，每次补液都含上述培养因子IL-18、IL15RAIL15融合蛋白、anti-HER2和Anti-CD16，维持细胞密度在2ⅹ106/ml，7~9天；
其中IL-18工作浓度10~500ng/ml，IL15RAIL15融合蛋白工作浓度10~500ng/ml，anti-HER2工作浓度0.1~10ug/ml， Anti-CD16工作浓度0.1~10ug/ml；
(3)维持阶段
将培养因子更换为IL-2工作浓度10ng/ml，并调整细胞密度到1ⅹ106/ml，继续培养至细胞表型检测为经典NK表型CD3阴性CD56阳性的细胞群。
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